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人肿瘤多药耐药基因PCR检测试剂盒说明书
参考价:

型号:50T

更新时间:2021-03-13  |  阅读:612

详情介绍


注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。

 产品名称

 人肿瘤多药耐药基因PCR检测试剂盒说明书

 规格

 50T

 货号

 LZP7787

实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1(10pM)               2μl
引物2(10PM)              2μl
Taq酶(2U/μl)            1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl)    1 μl
ddH2O至               50 μl
PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
十二(标准品)HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb二甲酰硫素

二(DEA)(标准品)Liprin β1 AntibodyN-甲酰基-2--5-三氟

2,二硝基标准溶液(1.00mg/ml,基体:甲)Ghost Dye™ Red 780 Viability DyeMETHOXY-2-(TRIFLUOROMETHYL)PHENYLBORONIC ACID, PINACOL ESR

标准溶液(100μg/ml,溶剂:甲)TRAF4 (D1N3A) Rabbit mAb反式-基-1-基-酸

2,二甲(标准品)Syntaxin 1A (D4E2W) Rabbit mAb2-[(酰硫)甲基]-基酸

2,5-二甲(标准品)Flotillin-1 (D2V7J) XP® Rabbit mAb(R)-(-)-alpha-甲氧基

3,二(标准品)Flotillin-1 (D2V7J) XP® Rabbit mAb2,5-二氟磺酰

3,二联(标准品)Vinculin (E1E9V) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)羟基-2-萘甲酸甲酯

直接蓝6(标准品)ALDH2 AntibodyFLUORO-5-METHOXYBIPHENYL-CARBOXYLIC ACID

分散橙37(标准品)Smac/Diablo (D5S3R) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)6--5-甲基吡啶-酸

邻二甲酸二酯(标准品)MAVS (D5A9E) Rabbit mAb (PE Conjuga)1-溴-2-甲基萘

二甲基二化锡(标准品)ULK1 (D8H5) Rabbit mAb (Biotinylad)(2-溴-氧基)四氢-2H-吡喃

二基锡(标准品)VISTA (D1L2G™) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)硒脲

甲基内吸(标准品)T2 (D6B9Y) Rabbit mAb6-(CYCLOPROPYLAMINO)-5-NITROQUINOLINE

2,4'-滴滴涕(标准品)PKM1 (D30G6) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)5-甲氧基黄酮

2,4′-DDT标准溶液(100μg/mL,基体:异辛烷)PSD93 (D4Z4D) Rabbit mAb(氟-甲氧基基)三氟酸

4,4'-滴滴涕(标准品)DMAP1 (D4O2G) Rabbit mAb(R)-(+)-2-酸甲酯

溴菊酯(标准品)SimpleChIP® Human DMD Intron 2 Primers2-吡啶酸甲酯

白介素5受体alpha(IL5RA)ELISA试剂盒Phospho-IRAK1 (Thr387)  酸化白介素-1受体相关激酶1100 ul

白介素5(IL-5)ELISA试剂盒IRF3  干扰素调节因子3100 ul

白介素4受体(IL4R/CD124)ELISA试剂盒Phospho-IRF3 (Ser396)  酸化干扰素调节因子3100 ul

白介素4(IL-4)ELISA试剂盒IRAK4  白介素-1受体相关激酶4100 ul

白介素37(IL-37)ELISA试剂盒IL-1RA  白介素-1受体拮抗剂100 ul

白介素35(IL-35)ELISA试剂盒IL-1R1  白介素1受体1100 ul

白介素33(IL-33)ELISA试剂盒IL-1R II  白介素1受体Ⅱ100 ul

白介素32(IL-32)ELISA试剂盒IRF4  干扰素调节因子4100 ul

白介素31(IL-31)ELISA试剂盒ILT2/CD85j  细胞表面免疫球蛋白样转录因子2100 ul
人肿瘤多药耐药基因PCR检测试剂盒说明书1号染色体开放阅读框57抗体23-Hydroxymangiferonic acid中文名:别名:分子式:C30H46O4

2号染色体开放阅读框18抗体27-Hydroxymangiferolic acid中文名:别名:分子式:C30H48O4

细胞色素c氧化酶6抗体27-Hydroxymangiferonic acid中文名:别名:分子式:C30H46O4

细胞质膜微囊蛋白-2抗体3-Oxotirucalla-7,24-dien-21-oic acid中文名:别名:分子式:C30H46O3

磷酸化细胞质膜微囊蛋白-2抗体Mangiferolic acid中文名:别名:分子式:C30H48O3

 

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