详情介绍
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 人遗传小脑共济失调PCR检测试剂盒厂家 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7786 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
三标准溶液(100μg/ml,u=5%)Complexin-1 (D5Q5H) Rabbit mAb1-(BROMOPHENYLSULFONYL)PIPERAZINE
三标准溶液(10μg/ml,u=6%)Calponin 1 (D8L2T) XP® Rabbit mAb(1R,2R,5R)-(+)-2-羟基-蒎烷酮
唑(标准品)Calponin 1 (D8L2T) XP® Rabbit mAb碳酸苄基酯
2,6-二氟甲酸(标准品)PTMScan® Propionyl-Lysine [Prop-K] Kit氨基-5-溴甲盐酸盐
二Standard for GC,≥99.5%(GC)CD3 (17A2) Rat mAb (APC-Cy7® Conjuga)BROMO-5-(PYRROLIDINOCARBONYL)PYRIDINE
二(标准品)EOMES (D8D1R) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-氨基-基-1-基-1H-吡唑-甲酸酯
二(标准品)RBM10 Antibody2-氟-5-异氧基基酸
十氢萘(标准品)p53 (DO-1) Mouse mAb1-BOC-氨基-2,2-二甲基1,烷二
二二(标准品)Mutant Ras Antibody Sampler Kit靛青三磺酸盐
二二(Standard for GC,≥99.5%(GC))PathScan® Total Bmi1 Sandwich ELISA Kit氟-(哌啶-1-羰基)基酸
草酸二酯(标准品)RPL11 (D1P5N) Rabbit mAb基甲酰
二(标准品)BRCC36 (D5E5H) Rabbit mAbPICOLINE-BORONIC ACID HCL
1,2-二(标准品)Alix (E4T7U) Rabbit mAb-D-氨酸
邻二甲酸二异壬酯(标准品)Acetyl-α-Tubulin (Lys40) (D20G3) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)对叔丁基磺酰
4,二溴联(标准品)Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb酸(1S,2S)-N,N'-双[(R)-2-羟基-2'-基-1,1'-联萘基-基亚甲基]-1,2-二基二合锰(III)
1,1-二标准溶液(1mg/ml,基体:甲)Phospho-SMAD2 (Ser465/Ser467) (E8F3R) Rabbit mAb6-氨基-2-萘甲酸甲酯
2,二肼(AR,≥99.0% (HPLC))Nav1.1 (D8X1Y) Rabbit mAb2-甲酰氨基酸
2,二肼(~0.005 M in ethanol,for TLC)HSL (D6W5S) XP® Rabbit mAb溴-2-氧基-5-氟基酸
白三D4(LTD4)ELISA试剂盒Ingrin Alpha V + Beta1 整合素αVβ1100 ul
白三C4(LTC4)ELISA试剂盒Ingrin Alpha V + Beta 3 整合素αVβ31 Kit
白三B4(LTB4)ELISA试剂盒Ingrin Alpha V + Beta 5 整合素αVβ51 Kit
白介素增强子结合因子2(ILF2/NF45/PRO3063)ELISA试剂盒Ingrin alpha E/CD103 整合素αE100 ul
白介素8(IL-8/CXCL8)自身ELISA试剂盒IQGAP1 支架蛋白100 ul
白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒IRF-1 干扰素调节因子1100 ul
白介素7(IL-7)ELISA试剂盒IRAK 白介素-1受体相关激酶1/220 ul
白介素6受体(IL-6R)ELISA试剂盒Phospho-IRAK1 (Ser376) 酸化白介素-1受体相关激酶1100 ul
白介素6(IL-6)ELISA试剂盒Phospho-IRAK1 (Thr209) 酸化白介素-1受体相关激酶1100 ul
人遗传小脑共济失调PCR检测试剂盒厂家桥粒糖蛋白4抗体Pazopanib中文名:帕唑帕尼别名:分子式:C21H23N7O2S
中间丝蛋白β-synemin抗体Capecitabine-2',3'-cyclic carbonate中文名:卡培他滨别名:分子式:C16H20FN3O7
MAP激酶激活死亡域蛋白4C抗体Irbesartan中文名:厄贝沙坦别名:分子式:C25H28N6O
肿瘤细胞调亡素/肿瘤坏死因子受体死亡受体6抗体Isoniazid中文名:别名:分子式:C6H7N3O
Erdj5/DNAJC10蛋白抗体Decoquinate中文名:癸氧喹酯别名:分子式:C24H355