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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 牛副结核分歧杆菌(MPB)核酸试剂盒价格 |
规格 | 48T |
货号 | LZP8005 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
OXOID胰蛋白胨TWEAK Receptor/Fn14 AntibodyR-1-BOC-2-氨甲基哌啶
β-萘黄酮Phospho-EGF Receptor (Tyr1148) Antibody-基吡啶
舒隆LCN2 (D4M8L) Rabbit mAb反式-(-)-2-氨基环戊盐酸盐
舒隆(标准品)TBP (D5C9H) XP® Rabbit mAb2-溴酰
L-抗坏血酸-2-酸三钠盐;Vc酸酯钠TBP (D5C9H) XP® Rabbit mAb二基二甲氧基硅烷
IBMX, 异丁基-1-甲基EGF Receptor (15F8) Rabbit mAb铂(0)-1,二-1,1,3,四甲基二硅氧烷
盐酸普鲁卡因BNIP3 (D7U1T) Rabbit mAb1-甲基-1-亚
盐酸普鲁卡因(标准品)Phospho-Jak2 (Tyr1007) (D15E2) Rabbit mAb2-溴-2'-酮
伏立诺他杂质Phospho-Jak2 (Tyr1007) (D15E2) Rabbit mAb9-菲酸
当药苷(标准品)Phospho-EGF Receptor (Tyr1173) (53A5) Rabbit mAb溴代二酸二酯
皂素(进分)Phospho-EGF Receptor (Tyr1173) (53A5) Rabbit mAb2--氨基吡
苦豆Anti-mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjuga) 6-基-2-吡
松柏Anti-mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 555 Conjuga) 炔锂二络合物
酰辅酶A钠盐Anti-mouse IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjuga) 2,二酸
甘氨胆酸Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 488 Conjuga) 甲氧基-甲酸
甘氨胆酸(标准品)Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 555 Conjuga)酸三丁酯
肌苷酸二钠DNMT3B (E9X7R) Rabbit mAb (Mouse Specific)6-羟基嘌呤
环索奈德Anti-rabbit IgG (H+L), F(ab')2 Fragment (Alexa Fluor® 647 Conjuga) 1-溴-2-氟-三氟甲氧基
仓鼠E选择素(SELE)ELISA试剂盒14-3-3 ζ(phospho Ser58)/FITC 荧光素标记酸化14-3-3 ζIgG20 ul
骆驼ELISA试剂盒2,4-D/FITC 荧光素标记2,4-二氧酸IgG100 ul
骆驼转化生长因子β2(TGFβ2)ELISA试剂盒4E-BP1/EIF4EBP1/FITC 荧光素标记4E结合蛋白1IgG20 ul
骆驼脂蛋白脂酶A2(Lp-PL-A2)ELISA试剂盒4EBP1(phospho Ser64) /FITC 荧光素标记酸化4E结合蛋白1IgG100 ul
骆驼天门冬氨酸氨基转移酶(AST)ELISA试剂盒4EBP1(phospho Thr37/46) /FITC 荧光素标记酸化4E结合蛋白1IgG300 ul
骆驼过氧化氢酶ELISA试剂盒phospho-4EBP1 (Ser65/Thr70)/FITC 荧光素标记酸化eIF4E结合蛋白IgG100 ul
骆驼谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)ELISA试剂盒14-3-3/RBITC 红色荧光素罗丹明标记14-3-3IgG100 ul
骆驼氨酸氨基转移酶(ALT)ELISA试剂盒5-HT/FITC 荧光素标记5-羟色IgG300 ul
骆驼β内啡肽(β-EP)ELISA试剂盒5-HT/RBITC 红色罗丹明标记5-羟色IgG100 ul
牛副结核分歧杆菌(MPB)核酸试剂盒价格磷酸化钙/钙调素依赖蛋白激酶CAMK2B/D/G抗体3'-O-Methylmurraol中文名:别名:分子式:C16H18O4
肿瘤易感候选基因3抗体Kimcuongin中文名:别名:分子式:C20H20O6
磷酸化肿瘤易感候选基因3抗体Luvangetin中文名:鲁望桔内酯别名:分子式:C15H14O4
神经元电压门控钙通道γ3/L-type Ca++CP γ3抗体Glycyrol中文名:甘草酚别名:分子式:C21H18O6
3号染色体开放阅读框25抗体4-Methylumbelliferone中文名:4-甲基伞形酮别名:7-Hydroxy-4-methylcoumarin分子式:C10H8O3