注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
酰吡啶ATP2A2/SERCA2 Antibody炔基噻吩

盐酸曲美他NFAT1 Antibody2-已

胶原蛋白(I型)ACTL6/BAF53 Antibody恶唑-2-羧酸

维替泊芬MTH1 (D6V4O) Rabbit mAb2-羟基-甲氧基甲

Biotin HPDP；N-(6-[生物素]己基)-3'-(2'-吡啶二硫)酰Gephyrin (D4J4R) Rabbit mAb二酮

胶原蛋白(BR)PIAS4 (D2F12) Rabbit mAb3,5-二酸

右雷佐生；右亚PIAS4 (D2F12) Rabbit mAb氟-三氟甲

A 801;A801FTH1 (D1D4) Rabbit mAb溴-2,6-二氟

Amresco 进分琼脂粉β-TrCP (D13F10) Rabbit mAb反-(1R,2R)-N,N'-二甲基1,2-环己烷二

氟伏沙明Tri-Methyl-Histone H3 (Lys27) (C36B11) Rabbit mAb (Biotinylad)五碳糖

呋喃西林SP (23E5) Mouse mAb基-4,10-二羟基-1H-吡喃[3',4':6,7]吲哚[1,2-B]喹啉-3,14(4H,12H)-二酮

呋喃西林（标准品）RBX1 Antibody二甲基砜

醋酸锌（二水）Di-Methyl-Histone H3 (Lys27) (D18C8) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)叔丁基化镁

舒巴坦钠MSL2 (D4V2N) Rabbit mAb苄氧基溴

舒巴坦钠(标准品)MIB1 Antibody1-(溴基)哌盐酸盐

头孢噻吩钠Crizotinib(S)-(-)-羟基-2-吡咯烷酮

甘草次酸(β型),18beta-甘草次酸FoxP1 (D35D10) XP® Rabbit mAb(溴甲基)酸

甘草次酸(β型),18beta-甘草次酸(标准品)FoxP1 (D35D10) XP® Rabbit mAb5-甲基咪唑-甲

仓鼠二(MDA)ELISA试剂盒 Beta-Amyloid(1-16) /FITC  荧光素标记β淀粉样肽（1-16）IgG100 ul

仓鼠白介素8(IL-8/CXCL8)ELISA试剂盒Beta-Amyloid(1-28)/FITC  荧光素标记β淀粉样肽（1-28）IgG300 ul

仓鼠白介素6(IL-6)ELISA试剂盒 Beta-Amyloid(1-40)/FITC  荧光素标记β淀粉样肽（1-40）IgG100 ul

仓鼠白介素3(IL-3)ELISA试剂盒Beta-Amyloid 1-40(CT)/FITC  荧光素标记β淀粉样肽（1-40）C端IgG20 ul

仓鼠白介素2(IL-2)ELISA试剂盒 Beta-Amyloid 1-40(CT)mouse/FITC  荧光素标记β淀粉样肽 1-40 C端IgG100 ul

仓鼠白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒 Beta-Amyloid 1-42 CT(A Beta1-42)/FITC  荧光素标记β淀粉样肽1-42 (C端)IgG100µl

仓鼠白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒 Beta-Amyloid(25-35)/FITC  荧光素标记β淀粉样肽（25-35）IgG100 ul

仓鼠γ干扰素(IFNG)ELISA试剂盒Beta-Amyloid(31-35)/FITC  荧光素标记β淀粉样肽（31-35）IgG300 ul

仓鼠N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒14-3-3/FITC  荧光素标记14-3-3蛋白IgG100 ul
牛结核分歧杆菌(MB)核酸试剂盒规格21号染色体开放阅读框33抗体Broussonin A中文名：别名：分子式：C16H18O3

CRTAM抗体Broussonin B中文名：别名：分子式：C16H18O3

心肌肌钙蛋白抗体Furan-2-carboxylic acid中文名：别名：分子式：C5H4O3

多配体蛋白聚糖1抗体1,2-Benzenediol中文名：邻苯二酚别名：分子式：C6H6O2

T细胞特异性趋化因子抗体Pyrogallol中文名：邻苯三酚别名：Pyrogallic acid分子式：C6H6O3
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。