注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
罗汉松树脂酚-4'-O-β-龙胆二糖苷(标准品)BCL6 (D4I2V) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)溴基肼

石蕊Microcephalin-1/BRIT1 (D38G5) Rabbit mAb对二甲

7-O-甲基芦荟新甙A(标准品)Microcephalin-1/BRIT1 (D38G5) Rabbit mAb溴

肉苁蓉苷A(标准品)Beclin-1 (2A4) Mouse mAb羟酸

芦荟新甙D(标准品)TIF1β Antibody(S)-哌啶甲酸

苦玄参苷IV(标准品)TIF1β Antibody羟基-2-丁酮

瓜子金皂苷XXXI(对照品)TIF1β (C42G12) Rabbit mAb2-丁炔酸

俾斯麦棕RTIF1β (C42G12) Rabbit mAb2-溴-氟甲

俾斯麦棕YSLK Antibody基锂

偶氮膦ITLK1 Antibody氨基嘧啶

（标准品）Siglec-10 (D4E3Z) Rabbit mAb (Mouse Specific)5-氨基嘧啶

茜素Phospho-HSL (Ser660) Antibody戊酸

姜黄素Phospho-TIF1β (Ser824) Antibody酸酯

姜黄素（标准品）Phospho-TIF1β (Ser824) AntibodyD-吡喃葡萄糖

姜黄素（高纯）Ape1 Antibody1,环已二酮

荧光素Cyclin E1 (HE12) Mouse mAb叶酸

钙黄绿素Cyclin E1 (HE12) Mouse mAb2-羟基喹啉

瑞氏色素Phospho-Cyclin B1 (Ser147) Antibody(S)-2-甲基吡咯烷

Coronin-1A(Coro1a/Coro1)ELISA试剂盒TSLP  胸腺基质淋巴细胞生成素-1100 ul

c-jun ELISA试剂盒CRLF2  胸腺基质淋巴细胞生成素受体100µl

c-fos ELISA试剂盒TSP-1/THBS1  凝血酶敏感蛋白1100 ul

CDP-甘油二酯--甘油-3-酸3脂酰转移酶,线粒体(PGS1)ELISA试剂盒TTF-1  甲状腺核转录因子-1100 ul

CDCP1 ELISA试剂盒TTF-2  甲状腺转录因子-2100 ul

CD8分子(CD8)ELISA试剂盒Tubulin-alpha  微管蛋白100 ul

CD68分子(CD68)ELISA试剂盒Tubulin- Beta  微管蛋白（免疫组化用）20 ul

CD63分子(CD63)ELISA试剂盒Tubulin- Beta/Tuj-1  微管蛋白（免疫组化用）200 ul

CD4分子(CD4)ELISA试剂盒gamma tubulin  微管蛋白-gamma20 ul
猪圆环病毒型(PCV-)核酸试剂盒厂家卵巢滤泡激素抗体（BHD综合征）5-(1-Piperazinyl)benzofuran-2-carboxamide中文名：别名：分子式：C13H15N3O2

脆性X相关蛋白1抗体Vilazodone hydrochloride中文名：盐酸维拉唑酮别名：分子式：C26H28ClN5O2

脂肪酰辅酶A还原酶2抗体2-Cya-N-[4-(Trifluoromethyl)Phenyl]Acetamide中文名：别名：分子式：C10H7F3N2O

脆性X相关蛋白样2抗体Teriflumide中文名：特立氟胺别名：分子式：C12H9F3N2O2

脂肪酸去饱和酶1抗体3-(3-Chloropropyl)-1,3-dihydro-7,8-dimethoxy-2H-3-benzazepin-2-one中文名：别名：分子式：C15H18Cl3
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。