详情介绍
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 猪痢疾蛇形螺旋体(SH)核酸试剂盒说明书 |
规格 | 48T |
货号 | LZP7975 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
皂黄DAPI1-基-1,2-二酮
橙黄G;酸性橙10DRAQ5®L-天冬酰一水物
喹啉黄DRAQ5®2'-甲氧基酮
橙黄ⅡCD40 (D8W3N) Rabbit mAb氨基喹啉
盐酸吖啶黄Propidium Iodide (PI)/RNase Staining Solution羟基喹啉
柯衣定Phospho-SLP-76 (Ser376) (D7S1K) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)7-氨基喹啉
日落黄Jak2 (D2E12) XP® Rabbit mAb (Sepharose® Bead Conjuga)N-氨基-氮杂双环[3.3.0]辛烷盐酸盐
酒石黄;柠檬黄;酸性黄 23Phospho-Met (Tyr1234/1235) (D26) XP® Rabbit mAb (Sepharose®Bead Conjuga)特戊
酸性黄17Phospho-p38 MAPK (Thr180/Tyr182) (3D7) Rabbit mAb (Biotinylad)2,6-萘二酚
5-TAMRA;5-羧基四甲基罗丹明琥珀酰亚脂Phospho-Stat3 (Tyr705) (D3A7) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2,7-二羟基萘
吉拉尔特试剂TPhospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb (Biotinylad)睾酮
钽试剂NRF2 (D1Z9C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)双酮葡萄糖
左西孟旦Rabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control (Biotinylad)甲酸酯
锌试剂Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (Biotinylad)盐酸异
铅试剂MMP-2 (D4M2N) Rabbit mAb2-巯基并咪唑
镁试剂ISNARK/NUAK2 Antibody2-甲基环己
镁试剂IICDK8 (G398) Antibody2-甲基环己酮
高铁试剂CDK8 (G398) Antibody碳酸
FMS样酪氨酸激酶3配体(Flt3L)ELISA试剂盒TRP2 酪氨酸酶相关蛋白2100 ul
FMS样酪氨酸激酶3(Flt3)ELISA试剂盒Thioredoxin 硫氧还蛋白20 ul
FK506结合蛋白12-雷帕霉素相关蛋白1(FRAP1)ELISA试剂盒TRP1/gp75 酪氨酸酶相关蛋白1100 ul
E钙黏蛋白/上皮钙黏蛋白(E-Cad)ELISA试剂盒TRPM2 瞬时受体电位离子通道蛋白(M亚家族)100 ul
ERp57 ELISA试剂盒c/Troponin T 心肌特异性肌钙蛋白T100 ul
E3-RSIκB ELISA试剂盒TSARG3 生精细胞凋亡相关基因3100 ul
D-酸脱氢酶(D-LDH)ELISA试剂盒TSARG4 生精细胞凋亡相关基因420 ul
D-酸ELISA试剂盒TSARG6/DNAJB13 生精细胞凋亡相关基因6100 ul
D-甘油3-酸ELISA试剂盒TSARG7 发生相关的新基因20 ul
猪痢疾蛇形螺旋体(SH)核酸试剂盒说明书巨噬细胞炎性蛋白1α抗体Dihydropisylvin momethyl ether中文名:二氢赤松素单甲醚别名:分子式:C15H16O2
巨噬细胞炎性蛋白19抗体Pisylvin momethyl ether中文名:银松素单甲醚别名:分子式:C15H14O2
CD244抗体Ethylparaben中文名:别名:Ethyl 4-hydroxybenzoate分子式:C9H10O3
磷酸化细胞角蛋白17抗体m-Methoxyphel中文名:间甲氧基苯酚别名:分子式:C7H8O2
α-s1酪蛋白抗体Caraphel A中文名:别名:分子式:C42H28O9