详情介绍
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 禽脑脊髓炎病毒(AEV)核酸试剂盒价格 |
规格 | 48T |
货号 | LZP7949 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
锌原卟啉NSF (D31C7) XP® Rabbit mAb2-溴丁酸酯
美伐他汀,康百汀SNAP25 (D110) Antibody(S)-1-溴-2-甲基丁烷
美伐他汀(标准品)PKA RI-α/β Antibody1,2-戊二
6-氨基青霉烷酸PhosphoPlus® Syk (Tyr525/526) Antibody Duet溴-甲
L-天门冬酰酶,门冬酰酶Phospho-4E-BP1 (Thr37/46) (236B4) Rabbit mAb (Biotinylad)-甲氧基
2,2'-联喹啉-4,4'-二甲酸二钠(BCA)CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAb10-溴-1-癸
魏因勒卜链接剂,N-芴甲氧羰基-N-甲氧基-氨基酸CD5 (E8X3S) XP® Rabbit mAb(溴酰基)吡啶盐
N-Fmoc-D-1,2,3,四氢异喹啉-羧酸Rab3A Antibody2-氟-5-三氟
N-苄氧羰基-L-氨酸SirT1 (D60E1) Rabbit mAb (Mouse Specific)(S)-羟基丁酸甲酯
N-苄氧羰基-L-谷氨酰Vimentin (R28) Antibody2-噻吩-5-磺酰
N-CBZ-L-氨酸Ubiquitin Antibody甲基磺酰苄溴
盐酸美卡因PHF20 (D96F6) XP® Rabbit mAbalpha-溴代-酮
N-苄氧羰基-L-丝氨酸Phospho-Tau (Ser202) (D4H7E) Rabbit mAb2-溴-甲酸
N-苄氧羰基-L-苏氨酸Phospho-Keratin 20 (Ser13) (D9M6O) Rabbit mAb异基甲酸
N-CBZ-beta-氨酸HMGB1 Antibody氨基-5-吡唑
CBZ-D-谷氨酸α-苄酯Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb基吡啶
N-苄氧羰基-L-酪氨酸Ubiquitin (P4D1) Mouse mAb环基-氧代丁酸,95%
Z-L-酪氨酸甲酯CYR61 (E5W3H) Rabbit mAb7-溴-1H-吲唑
阿米洛利敏感钠通道α亚基(SCNN1A)ELISA试剂盒TGF beta 3 转移生长因子β3100 ul
阿立新A(Orexin A)ELISA试剂盒TGF Beta R1/TGFBR1 转移生长因子β受体1100 ul
阿黑皮素原(POMC)ELISA试剂盒TGF beta R2/TGFBR2 转移生长因子β受体220 ul
δ氨基酰酸脱水酶(ALAD)ELISA试剂盒TGF Beta R3 转移生长因子β受体3100 ul
γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)ELISA试剂盒TGM3 转谷氨酰酶3100 ul
γ干扰素受体(IFN-γR)ELISA试剂盒Thiosr-containing proin 1 按蚊硫酯包含蛋白-1100 ul
γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒ERdj5 ERdj5蛋白100 ul
γ分泌酶ELISA试剂盒thrombin II 凝血酶Ⅱ100 ul
γ-氨基丁酸受体亚基α1(GABRA1)ELISA试剂盒phospho-p38MAPK/MAPK14 (pThr180/pTyr182) 酸化p38MAPK100 ul
禽脑脊髓炎病毒(AEV)核酸试剂盒价格前列环素合成酶抗体Yatein中文名:别名:分子式:C22H24O7
软骨寡聚基质蛋白抗体Fragransin A2中文名:别名:分子式:C20H24O5
T淋巴细胞CD1A抗体Lancifolin C中文名:别名:分子式:C22H28O5
磷酸化周期素B1抗体Lyoniside中文名:别名:分子式:C27H36O12
胞浆型磷脂酶A2抗体Boehmenan中文名:别名:分子式:C40H40O12