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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 禽偏肺病毒(aMPV)核酸试剂盒说明书 |
规格 | 48T |
货号 | LZP7947 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
2-氟-1,二甲基化咪唑翁六氟酸酯(DFIH) PARN (A42) Antibody嘧啶酮
肥胖抑制素(大鼠) Snail (L70G2) Mouse mAb2-氨基恶唑
苄索铵Human Brain-Derived Neurotrophic Factor (BDNF)对甲氧基酸
β-淀粉样蛋白(1-42),大鼠PARN (P620) Antibody姜黄素
血管紧张素IPTMScan® Lys-C Proase溴-氟甲
血管紧张素IIIRabbit (DA1E) mAb IgG XP® Isotype Control对氟酰
蜂毒明肽; 蜂针液明肽Phospho-Bcr (Tyr177) Antibody对氟
枸橼酸米芬,克罗米芬Bcr Antibody5-甲基-1-茚酮
ML-176;SR-3335Acetyl-Histone H3 (Lys27) (D5E4) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-溴嘧啶
Semaxanib(SU-5416 )VCAM-1 (D8U5V) Rabbit mAb (Mouse Specific)嘧啶-5-羧酸
米尔贝肟Gα(z) Antibody对氟甲
2-巯基吡啶-N-氧化物 锌盐;吡啶硫酮锌,吡硫锌GAPDH (14C10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)对氟甲
伐地考昔GAPDH (14C10) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)氨基-2-甲酸甲酯
胃膜素,胃粘蛋白,人胃泌素Bcr-Abl (b2a2 Junction Specific) (L99H4) Mouse mAb氨基-溴甲酸甲酯
UDPGA Na;尿苷-5'-二酸葡糖酸三钠盐MCP-1 Antibody (Carboxy-rminal Antigen)羟甲基哌啶
替卡西林,替卡西林二钠UTF1 Antibody1,二酸
替卡西林(标准品)Tropomyosin-1 (D12H4) Rabbit mAb6-氮杂脲嘧啶
RGD肽Phospho-p56Dok-2 (Tyr351) Antibody5-氟-邻二甲
白介素1受体样1(IL1RL1)ELISA试剂盒RT 端粒酶逆转录酶100 ul
白介素1受体拮抗剂(IL1Ra)ELISA试剂盒TRODOTOXIN ( TTX ) 素100 ul
白介素1可溶性受体Ⅱ(sIL-1RⅡ)ELISA试剂盒TP-1/P1 端粒酶相关蛋白120 ul
白介素1β前体(pro-IL1B)ELISA试剂盒traspan5 四分子交联体5100 ul
白介素1β(IL-1β)ELISA试剂盒TFF2 三叶肽因子220 ul
白介素1α(IL-1α)ELISA试剂盒TFF3 三叶肽因子3100 ul
白介素18(IL-18)ELISA试剂盒TIF1 Alpha/TRIM24 转录中介因子Tif1α100 ul
白介素17(IL-17)ELISA试剂盒TIF1 beta/KAP1 转录中介因子Tif1β100 ul
白介素16(IL-16)ELISA试剂盒Phospho-TIF1beta (Ser824) 酸化转录中介因子Tif1β100 ul
禽偏肺病毒(aMPV)核酸试剂盒说明书β链接素相互作用蛋白1抗体Xanthyletin中文名:花椒树皮素甲别名:美洲花椒素分子式:C14H12O3
磷酸化β链接素相互作用蛋白1抗体Diversoside中文名:别名:Marmin 6'-O-glucoside分子式:C25H34O10
磷酸化粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子受体β抗体Chalepensin中文名:别名:Xylotenin分子式:C16H14O3
磷酸化N-钙粘附分子抗体Hydramicromelin D中文名:别名:分子式:C15H14O7
磷酸化后期促进复合蛋白3抗体7-Prenyloxycoumarin中文名:7-异戊烯氧基别名:7-Isopentenyloxycoumarin分子式:C14H14O3