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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
DNA酶,脱氧核糖核酸酶ⅠPhospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2,5-二氟甲酸

高峰淀粉酶来源于米曲霉(4000U/g)1BB/CD137/TNFRSF9 (D2Z4Y) Rabbit mAb基*氧基硅烷

高峰淀粉酶来源于米曲霉(100U/mg )Phospho-FLT3 (Tyr591) Antibody2,2'-偶氮二异丁基脒

甘油-酸脱氢酶FLT3 (8F2) Rabbit mAb

菠萝蛋白酶Phospho-FLT3 (Tyr969) (C24D9) Rabbit mAb2-氟磺酰

DL-对氨酸Clusrin (D7N2K) XP® Rabbit mAb辛酸亚锡

延胡素酸氨基酯Clusrin (D7N2K) XP® Rabbit mAb肼(无水)

辅羧酶;羧化辅酶;焦酸硫素Ajuba (D4D8P) Rabbit mAb盐酸丁脒

吲哚酸酯Phospho-FLT3 (Tyr589/591) (30D4) Rabbit mAb硫酸盐

α-环糊精Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)哌-2-羧酸

氧化酶(XOD)Phospho-FLT3 (Tyr591) (54H1) Mouse mAb3,二甲酰

酰化酶,L-氨基酰化酶Perilipin-1 (K117) Antibody2-氨基-N-(2--6-基)噻唑-5-甲酰

胰蛋白酶1:250eIF4G2/p97 (D1A10) Rabbit mAb2-氨基-5-溴噻唑

胰蛋白酶1:2500TrK (pan) (A7H6R) Rabbit mAb (Biotinylad)硝基咪唑

阿利多eIF4H (D85F2) XP® Rabbit mAb1-甲基-硝基咪唑

核糖核酸酶A(美仑)；RNase A;核糖核酸酶IeIF4H (D85F2) XP® Rabbit mAb5-溴噻唑

5‘-酸吡哆，一水Perilipin-1 (D418) Antibody2-咪唑

NADPH;还原辅酶Ⅱ四钠盐;(罗氏)Phospho-FGF Receptor (Tyr653/654) Antibody2-(三氟甲基)基

核因子κB(NF-κB)ELISA试剂盒Rb/P105 RB  成视网膜细胞瘤抑癌蛋白100 ul

和肽素(copeptin)ELISA试剂盒phospho-Rb/p105-Rb(Ser780)  酸化成视网膜细胞瘤抑癌蛋白20 ul

含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶2(Tie-2)ELISA试剂盒RRAD  RRAD100 ul

含免疫球蛋白样环和上皮生长因子样域酪氨酸激酶1(Tie-1)ELISA试剂盒Rsk2/MAPKAP Kinase 1b  核糖体S6激酶RSK2100 ul

过氧化脂质/过氧化物酶(LPO)ELISA试剂盒Phospho-RSK2 (Ser227)  酸化核糖体S6激酶RSK220 ul

过氧化物酶体增殖因子活化受体γ( PPAR-γ)ELISA试剂盒Phospho-RSK2 (Tyr529)  酸化核糖体S6激酶RSK2100 ul

过氧化物酶体增殖物激活受体β(PPAR-B/PPARD)ELISA试剂盒RSK3/Ribosomal S6 kinase 3  核糖体蛋白S6激酶家族RSK320 ul

过氧化物酶体增殖物激活受体α(PPAR-α)ELISA试剂盒Phospho-RSK3 (Thr353/356)   酸化核糖体蛋白S6激酶家族RSK3500 ul

过氧化氢酶(CAT)ELISA试剂盒Phospho-RSK3 (Thr356/Ser360)   酸化核糖体蛋白S6激酶家族RSK3100 ul
猪流感病毒PCR检测试剂盒厂家组蛋白脱乙酰化酶6（HDAC6）活性比色法定量elisa试剂盒    20次    *

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