详情介绍
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 猪痢疾密螺旋体PCR检测试剂盒厂家 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7902 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
CHAPSO;[(胆固氨基)二甲基氨基]-2-羟基-1-磺酸IRS-1 (D23G12) Rabbit mAb1,12-二氨基十二烷
二硫赤藓(D);1,二硫代赤藓VEGF Receptor 3 (C82A2) Rabbit mAbL-谷氨酸双苄酯对甲磺酸盐
N-硝基-L-精氨酸甲酯YAP/TAZ (D24E4) Rabbit mAb (Biotinylad)1,6-二溴芘
N-甲酰-L-酪氨酸酯(BE)PSD95 (D74D3) XP® Rabbit mAbS-*基-L-半胱氨酸
AEBSF丝氨酸抑制剂PSD95 (D74D3) XP® Rabbit mAb(R)-吡咯烷
AEBSF(进分)α-Smooth Muscle Actin (D4K9N) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)2-氟-5-甲
盐酸贝他定(进口)Drosha (D30F3) Rabbit mAb9-双环[3.3.1]壬烷
邻菲啰啉盐酸盐,一水MeCP2 (D4F3) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)1,双(2,6-二异基)-4,5-二氢咪唑 四氟酸盐
膦酰二肽钠eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAb2,4,6-三氟甲酸
癸基喃葡萄糖;癸基吡喃葡萄糖苷eIF3A (D51F4) XP® Rabbit mAb2-氨基二甲酮
德罗特韦(GSK-1349572,DTG)eIF3H (D9C1) XP® Rabbit mAb2-氨基-酚
十二烷基吡喃葡萄糖苷;月桂酰基喃葡萄糖HIF-1β/ARNT (C15A11) Rabbit mAb氨基-酚
羟基纤维素(20000~30000 mpa.s)Acetyl-Histone H2B (Lys20) (D7O9W) Rabbit mAb酸钠
羟基纤维素(5500-6500 mpa.s)Atg3 Antibody5-氨基-2-溴甲酸
羟基纤维素(40~60 mpa.s)Atg3 Antibody5-氨基-2-甲酸
异基-β-D-硫代半糖苷(IPTG)IKKε (D61F9) XP® Rabbit mAb氨基-甲氧基甲酸
甘露糖;D-甘露糖IKKε (D61F9) XP® Rabbit mAb2-氨基-5-酚
D-甘露糖(标准品)CTCF (D1A7) XP® Rabbit mAb甲
基质金属蛋白酶2/明胶酶A(MMP-2/Gelatinase A)ELISA试剂盒Phospho-Rb (Ser780) 酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白120 ul
基质金属蛋白酶14(MMP-14)ELISA试剂盒Phospho-Rb (Ser807/Ser811) 酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白1300 ul
基质金属蛋白酶13(MMP-13)ELISA试剂盒Phospho-Rb (Thr821) 酸化视网膜母细胞瘤相关蛋白1100 ul
基质金属蛋白酶10(MMP-10)ELISA试剂盒secretory IgA 分泌型免疫球蛋白A100 ul
基质金属蛋白酶1(MMP-1/Collagenase I)ELISA试剂盒RECK 金属蛋白酶抑制因子RECK100 ul
肌质网膜钙ATP酶(SERCA)ELISA试剂盒REG4/RELP 再生基因蛋白4100 ul
肌酸激酶同工酶MM(CK-MM)ELISA试剂盒RELN/Reelin 络丝蛋白100 ul
肌酸激酶同工酶MB(CK-MB)ELISA试剂盒Rbms3 抑癌基因Rbms3100 ul
肌酸激酶同工酶BB(CK-BB)ELISA试剂盒RET/C ret 指状蛋白RET100 ul
猪痢疾密螺旋体PCR检测试剂盒厂家桥粒芯糖蛋白2抗体Arjulic acid中文名:别名:2α,3β,23-Trihydroxyolean-12-en-28-oic acid分子式:C30H48O5
细胞间粘附分子非整合素蛋白3抗体22α-Hydroxy-3-oxo-12-ursen-30-oic acid中文名:别名:分子式:C30H46O4
CD299抗体Moronic acid中文名:别名:分子式:C30H46O3
C型凝集素结构域家族4成员A抗体Senegalide中文名:别名:分子式:C26H30O8
DNA损伤结合蛋白1抗体Swietemahalactone中文名:别名:Senegalension A分子式:C27H30O10