注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
1,6-二氨基己烷-N,N,N',N'-四酸(>98.0%(T))PathScan® Total YAP Sandwich ELISA Kit5-氟-

二基三基五酸二酐(>98.0%(T))PHD-2/Egln1 Antibody2-氟-甲基吡啶

二四酸二氢二二水合物(>98.0%(T))PTMScan® Basophilic Kinase Substra Motif [(R/X)(R/X)Xp(S/T)] Kit2-氟-5-甲基吡啶

二-N,N'-二酸基-N,N'-二酸水合物(>98.0%(T))IRE1α (14C10) Rabbit mAb环基溴化镁

N,N,N',N'-二四(亚甲基膦酸)水合物(>98.0%(T))IRE1α (14C10) Rabbit mAb氨基吡唑并[3,d]嘧啶

二四酸二酐(>98.0%(T))Inflammasome Antibody Sampler Kit羟基吲哚

增甘(>97.0%(T))PIP5K1C AntibodyNα-CBZ-Nε-BOC-D-赖氨酸

N-(2-羟基)二-N,N'N'-三酸三钠二水合物(>98.0%(T))Annexin A1 Antibody氨基-溴吡啶

N-(2-羟基)二-N,N',N'-三酸(>98.0%(T))Phospho-Cyclin D1 (Thr286) (D29B3) XP® Rabbit mAb2,二氟溴苄

N-甲基亚氨二酸(>98.0%(GC)(T))Phospho-Cyclin D1 (Thr286) (D29B3) XP® Rabbit mAb间溴甲

次氮基三酸二钠盐(>99.0%(T))GCN2 Antibody2-氨基-苄氧基吡啶

N-(2-羧基)亚氨基二酸(>98.0%(T))HSPA4/Apg-2 Antibody四甲基哌啶

次氮基三(亚甲基膦酸)(约50%的水溶液,约2.2mol/L)GCN5L2 (C26A10) Rabbit mAb2-噻吩-5-甲酸

次氮基三(亚甲基膦酸)(约50%的水溶液,约2.2mol/L)[螯合剂]GCN5L2 (C26A10) Rabbit mAb甲基-甲酸甲酯

1,二-N,N,N',N'-四酸(>98.0%(T))G9a/EHMT2 (C6H3) Rabbit mAb2-溴-甲氧基吡啶

三四-N,N,N',N'',N''',N'''-六酸(>98.0%(T))G9a/EHMT2 (C6H3) Rabbit mAb镁

TAN[=1-(2-噻唑偶氮)-2-萘酚](>99.0%(T))SimpleChIP® Human PAI-1 Promor PrimersL-谷氨酸-5-叔丁基酯

二甲偶氮紫II(>95.0%(HPLC))VRK1 (1F6) Mouse mAbBoc-L-谷氨酸

抗环胍氨酸肽(Anti-CCP-antibody)ELISA试剂盒PRDX3  过氧化还原酶3100 ul

抗核膜糖蛋白210(gp210)ELISA试剂盒RRM1  核糖核苷酸还原酶120 ul

抗弓形虫IgMELISA试剂盒PRL  泌素100 ul

抗弓形虫IgGELISA试剂盒PRL1/PTP4A1  肝再生酸酯酶120 ul

抗单核细胞(AMA)ELISA试剂盒PRL2/PTP4A2  肝再生酸酯酶2300 ul

抗促甲状腺素受体(TRAb)ELISA试剂盒PRL3/PTP4A3  酸酯酶3蛋白100 ul

抗α-胞衬蛋白IgG/IgA(α-Fodrin IgG/IgA)ELISA试剂盒prox-1  prox-1300 ul

抗IVIgGELISA试剂盒PH-4/P4H-TM  脯氨酸水解酶4100 ul

抗IgE受体ELISA试剂盒PHD3  脯氨酸羟化酶100 ul
致病性大肠杆菌PCR检测试剂盒说明书Cordon bleu蛋白样1抗体Phoyunbene B中文名：别名：分子式：C17H18O5

凝集蛋白家族11抗体Effususol A中文名：别名：分子式：C18H20O3

铜代谢结构域蛋白1抗体Lusianthridin中文名：4,7-二羟基-2-甲氧基-9,10-二氢菲别名：分子式：C15H14O3

铜代谢结构域蛋白7抗体Thunalbene中文名：3,3'-二羟基-5-甲氧基二苯乙烯别名：分子式：C15H14O3

COMM结构域蛋白4抗体Integracin A中文名：别名：分子式：C37H56O8
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。