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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 质型多角体病毒PCR检测试剂盒厂家 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7890 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
四溴荧光素盐(>85.0%(HPLC))Phospho-FAK (Tyr576/577) Antibody2-溴-5-硝基-甲基吡啶
溶剂红 48(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-FAK (Tyr576/577) AntibodyN-基-哌啶酮
3,4,5,6-四荧光素Phospho-FAK (Tyr397) Antibody三氟
赤藓红B(>95.0%(E))Phospho-FAK (Tyr925) AntibodyL-谷氨酸二甲酯盐酸盐
结晶紫九水合物(>95.0%(T))Phospho-FAK (Tyr925) Antibody溴-羟基
四()酸(>98.0%(HPLC)(W))FAK Antibody1-(氨基基)吡咯烷
2-氨基白啶氢溴化物(>98.0%(T))FAK Antibody荧光素
CPC一水合物(=西吡铵一水合物)(>98.0%(HPLC)(T))GPX1 (C8C4) Rabbit mAb2,5-二溴吡
MDEPAP [=化1-甲基-(二氨基偶氮)吡啶盐](>95.0%(HPLC)(N))ROS1 (D4D6®) Rabbit mAb间三氟
邻甲酚酞络合钠盐ROS1 (D4D6®) Rabbit mAb2-溴代异丁酸甲酯
百里酚酞氨羧络合剂EEA1 (C45B10) Rabbit mAb四氢-2H-吡喃-酮
钙黄绿素蓝(>98.0%(T))EEA1 (C45B10) Rabbit mAb氟-三氟
甲基二甲酚蓝(>85.0%(HPLC))5-Lipoxygenase (C49G1) Rabbit mAb溴-2-酚
1,2-双(2-氨基氧基)烷-N,N,N',N'-四酸(>97.0%(HPLC))Endoglin Antibody (Mouse Specific)溴-甲酸甲酯
反-1,2-环己二四酸一水合物(>99.0%(T))Phospho-Pyk2 (Tyr402) Antibody氨基-氟甲酸
二亚基三五酸(>98.0%(T))Pyk2 Antibody1-溴-2,4,6-三氟
1,2-二氨基烷-N,N,N',N'-四酸(>98.0%(T))Annexin A1 (D5V2T) XP® Rabbit mAbN-BOC-O-苄基-L-丝氨酸
1,二氨基-2--N,N,N',N'-四酸(>98.0%(T))Annexin A1 (D5V2T) XP® Rabbit mAb8-氨基异喹啉
抗内皮细胞(AECA)ELISA试剂盒X proin (C-rminus) 抗肝病毒X蛋白(C端)300 ul
抗链球菌溶血素O(IgG)ELISA试剂盒Profilin 2 前纤维蛋白2100 ul
抗利尿激素/血管加压素/精氨酸加压素(ADH/VP/AVP)ELISA试剂盒Proin G 重组蛋白G100 ul
抗酸性酸酶5b(TRACP-5b)ELISA试剂盒Proin A 重组蛋白A20 ul
抗(AsAb)ELISA试剂盒RAM-11 RAM-11300 ul
抗甲状腺素(T4)(IgG)ELISA试剂盒RAMP-1 受体活性修饰蛋白1100 ul
抗甲状腺球蛋白(ATGA/TGAB)ELISA试剂盒RACK1 受体激活蛋白激酶C1100 ul
抗甲状腺过氧化物酶(TPO-Ab)ELISA试剂盒PRMT1 蛋白质精氨酸甲基转移酶1100 ul
抗肌内膜IgA(EMA IgA)ELISA试剂盒PRCP 脯氨酰羧肽酶20 ul
质型多角体病毒PCR检测试剂盒厂家三磷酸腺苷酶家族蛋白3A抗体Tabersonine中文名:它波宁别名:柳叶甘草碱分子式:C21H24N2O2
载脂蛋白J抗体Aristolactam AIIIa中文名:马兜铃内酰胺AIIIa别名:分子式:C16H114
载脂蛋白H抗体Ervamycine中文名:11-甲氧基它波宁别名:11-Methoxytabersonine分子式:C22H26N2O3
二磷酸腺苷核糖基转移酶4抗体Seneciphyllinine中文名:别名:12-Acetylseneciphylline分子式:C20H256
AKIRIN2蛋白抗体Corydalmine中文名:紫堇单酚碱别名:分子式:C20H234