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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 小麦PCR检测试剂盒规格 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7840 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
石油(for GC,用于环境分析)Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32)/FoxO4 (Thr28) (4G6) Rabbit mAb1-(甲氧基基)哌
季戊四(色谱固定液,150℃)Phospho-FoxO1 (Thr24)/FoxO3a (Thr32)/FoxO4 (Thr28) (4G6) Rabbit mAb双酰酮基二丁基锡
正(农残级)Phospho-HP1γ (Ser83) Antibody阿卡波糖
异硫酸酯(99%,用于HPLC标记)Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) Antibody溴五氟
正戊烷(农残级)Phospho-PAK1 (Thr423)/PAK2 (Thr402) Antibody5-吡啶-2-
聚酰粉(柱层析用)PAK1 Antibody1-(2-氟基)哌
酸(色谱级, 85-90%)PAK1 Antibody戊
聚酰粉(柱层析用,200-400目)CD8α (RPA-T8) Mouse mAb (APC-Cy7® Conjuga)甲氧基-甲氧基羰基酸
聚酰粉(柱层析用,10-30目)AMPKα (23A3) Rabbit mAb4,5-二哒-3(2H)-酮
酸氢二钠,二水(for HPLC, ≥99%(T))PAK1/2/3 Antibody2,6-二羟基酮
高酸钠,一水(色谱级,≥99.0%(T))PAK1/2/3 Antibody间甲磺酰
无水硫酸钠(农残级)Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) Antibody磺酰
无水硫酸钠(for HPLC,≥99.0%(T))Phospho-PAK1 (Ser199/204)/PAK2 (Ser192/197) Antibody氟试剂
碳酸氢钠(for HPLC,≥99.0%)Phospho-PAK1 (Ser144)/PAK2 (Ser141) Antibody奎诺二甲基酸酯
四丁基酸二氢铵(HPLC)Phospho-PAK1 (Ser144)/PAK2 (Ser141) Antibody氘代氢化锂铝
四己基硫酸氢铵(用于离子色谱,≥99.0%(T))Phospho-PAK2 (Ser20) Antibody溴甲基-5-并噻吩
三盐酸盐(for HPLC,≥99.0%)Phospho-PAK2 (Ser20) Antibody联二噻吩
四甲基硫酸氢铵(99%)PAK2 Antibody五氟甲
alpha突触核蛋白(淀粉样前体非A4成分蛋白)低聚物(SNCA oligomer)ELISA试剂盒NAP1/NAP1L1 核小体组装蛋白1100 ul
Alpha-D 酚/维生素E(Alpha-D TPL)ELISA试剂盒NB3/CNTN6 神经细胞NB3特定蛋白100 ul
alpha-1肾上腺素能受体(ADRA1)IgGELISA试剂盒P95/NBS1 DNA修复蛋白NBS1100 ul
AFG3样蛋白2(AFG3L2)ELISA试剂盒Phospho-p95/NBS1 (Ser343) 酸化DNA修复蛋白NBS1100 ul
Adropin(ENHO)ELISA试剂盒N-cadherin N-钙粘附分子100 ul
ADP-核糖基化因子5(ARF5)ELISA试剂盒E-cadherin 上皮钙粘附分子100 ul
ADP-核糖基化因子4(ARF4)ELISA试剂盒Nck1/Nck2 NCK衔接因子蛋白2100 ul
ADAM金属肽酶含血小板反应蛋白1基元4(ADAMTS4)ELISA试剂盒NCOA2/KAT13C 核受体辅助激活蛋白220 ul
8异F2α(8-iso-PGF2a)ELISA试剂盒NCoR1 核受体辅助抑制因子1100 ul
小麦PCR检测试剂盒规格脆性组氨酸三联体抗体Baclofen中文名:巴氯芬别名:分子式:C10H12Cl2
纤维母细胞表面蛋白抗体1-(4-(3-Chloropropoxy)-3-methoxyphenyl)ethane中文名:别名:分子式:C12H15ClO3
卵泡抑素抗体Nifuroxazide中文名:硝呋酚酰肼别名:分子式:C12H9N3O5
叉头蛋白J1抗体Prasugrel中文名:普拉格雷别名:分子式:C20H20F3S
脑型脂肪酸结合蛋白抗体Fexofenadine hydrochloride中文名:盐酸非索非那定别名:分子式:C32H40Cl4