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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 小反刍兽疫病毒PCR检测试剂盒说明书 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7839 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
二(农残级,≥99.9%,,含50-150ppm戊稳定剂)DLL1 AntibodyN-亚硝基新烟草
1,二氧六环(农残级)DLL1 Antibody基四氢吡喃
化铯(用于高通量质谱,99.9995%)DLL4 Antibody氟吡啶
(for HPLC, ≥99.5%)DLL4 Antibody(R)-(+)--1-基-1-
1,二甲基-2-咪唑啉酮(用于GC-HS,≥99.8%(GC))SirT6 AntibodyN-甲基对
二甲基亚砜(农残级)Myoglobin (D2F5X) Rabbit mAb对基
邻二甲酸二甲酯(色谱固定液)Acetyl-Histone H4 (Lys12) Antibody氧基酸酯
十二烷基*基化铵(DTAC)(99%,离子对色谱级)Histone H4 Antibody2,5-二
正庚烷(农残级,≥99%(GC))Evi-1 (C50E12) Rabbit mAb马布台诺
(农残级,≥99.8%)SimpleChIP® Human ZNF335 Promor Primers1-基-1,2-二酮
异辛烷(农残级,>99.5%(GC))Acetyl-Histone H4 (Lys8) Antibody1,5-二甲基-1H-吡唑-
(色谱固定液,30℃)Acetyl-Histone H4 (Lys8) Antibody2,2'-二吡啶甲基
甲(for HPLC,≥99.9%)Histone H2A.X AntibodyDL-羟基丁酸钠
甲(农残级, ≥99.9%)Galectin-9 (D9R4A) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)间甲
甲(LC-MS,≥99.9%)Naked2 (C36D3) Rabbit mAb2-甲氧基
二十酸甲酯(分析标准品,≥99.0% (GC))NUP98 (C37G10) Rabbit mAb-6-三氟甲基哒
甲基异丁酮(for HPLC,≥99.5%)NUP98 (C39A3) Rabbit mAb(R)-2-甲基-CBS-恶唑烷
异(农残级,99.9%)NUP98 (C39A3) Rabbit mAb2,3,4,5,6-五氟甲酸
A组链球菌菌壁多糖(ASP)ELISA试剂盒CHRNA4 烟型酰胆受体α4100 ul
A组链球菌多糖抗原(ASP Ag)ELISA试剂盒CHRNA7 烟型酰胆受体α7100 ul
A激酶PRKA锚定蛋白12(Akap12)ELISA试剂盒CHRNA2(neuronal) 烟型酰胆受体A2(神经型)100 ul
AT丰富结合域1A(ARID1A)ELISA试剂盒/NADPH oxidase 1 有丝分裂氧化酶1100 ul
Apelin ELISA试剂盒Nox3/NADPH oxidase 3 有丝分裂氧化酶2100 ul
Apelin 36(AP36)ELISA试剂盒NOX4/NADPH oxidase 4 NADPH氧化酶NOX家族的成员420 ul
apelin 13(AP13)ELISA试剂盒Nanog 胚胎干细胞关键蛋白100 ul
apelin 12(AP12)ELISA试剂盒NAIF1 proin 核凋亡诱导因子蛋白1100 ul
AP-5复合物β亚基(PP1030)ELISA试剂盒Natrexone 抗纳曲酮IgG100 ul
小反刍兽疫病毒PCR检测试剂盒说明书BEND3蛋白抗体7,4'-Di-O-methylapigenin 5-O-xylosylglucoside中文名:别名:分子式:C28H32O14
BEND4蛋白抗体Lethedioside A中文名:别名:分子式:C29H34O15
BEND6蛋白抗体3-Deoxysappane B中文名:别名:分子式:C16H14O5
立即早期癌基因BRLF1抗体(鼻咽癌基因)7-O-Methyleriodictyol中文名:7-O-甲基圣草酚别名:Sternbin分子式:C16H14O6
染色体相关蛋白H抗体Isosativan中文名:别名:7-O-Methylvestitol分子式:C17H18O4
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。