注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
氢化钙(98.5% metals basis(去除Mg), Mg <1%)Phospho-Chk1 (Ser345) Antibody2--氟甲酸

对硝基标准溶液(1.00mg/ml,基体：甲)Phospho-Chk1 (Ser345) Antibody2--5-氟甲酸

对硝基(分析标准品,用于环境分析)Dynamin I/II Antibody三氟甲氧基溴

环戊酮(标准品)Phospho-Chk1 (Ser317) Antibody2-溴-6-氟甲酸

代正烷(标准品)Phospho-Chk1 (Ser317) Antibody5-间二甲

(标准品)Phospho-Chk1 (Ser317) Antibody2-氟-(三氟甲基)甲

标准溶液(100μg/ml,u=3%,基体:酮)Phospho-Chk1 (Ser280) Antibody溴-2-甲

毒死蜱(标准品)SETD2 (D5T1Q) Rabbit mAb2-基-5-吡啶

毒死蜱标准溶液(10μg/ml,u=6～3%,酮)Phospho-Chk1 (Ser345) (133D3) Rabbit mAb1,二甲基-

高效氟菊酯(标准品)Phospho-Chk1 (Ser345) (133D3) Rabbit mAb2-甲基-5-硝基三氟甲

高效氟菊酯标准溶液(100μg/ml,u=2%,基体:石油)Phospho-Chk1 (Ser345) (133D3) Rabbit mAb2,二-7H吡咯[2,D]嘧啶

高效氟菊酯(标准品)POMC (D3R1U) Rabbit mAb2-氟-6-甲酸

氟菊酯标准溶液(100μg/ml,u=4%,基体：正己烷)Phospho-Chk1 (Ser296) Antibody-甲酸甲酯

氟菊酯标准溶液(10μg/ml,u=5%,基体：正己烷)Phospho-Chk1 (Ser296) AntibodyN-甲基-氟苄

菊酯(标准品)HA-Tag (6E2) Mouse mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)酰基-6-咪唑并[1,2-B]哒

菊酯(分析标准品,99.7%)Phospho-Threonine-X-Arginine Antibody4,4'-二甲氧基二甲酮

菊酯标准溶液(100μg/ml,u=3%)MEK1 (61B12) Mouse mAb1,2-二(溴甲基)

菊酯标准溶液(10μg/ml,u=6%)Na溴吲哚-2-羧酸酯

PL12/抗氨酰tRNA合成酶(PL12/AlaRS)ELISA试剂盒Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Ser400)  酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶8100 ul

PC4,SFRS1互动蛋白1(PSIP1)ELISA试剂盒Phospho-MAP3K8/Tpl2 (Thr290)  酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶820 ul

P53ELISA试剂盒MATH1  肠道分化干细胞MATH-1蛋白100 ul

P2蛋白(IgM)ELISA试剂盒Morphine  100 ul

P2蛋白(IgG)ELISA试剂盒Morphine  100 ul

P27蛋白(P27)ELISA试剂盒Morphine  100 ul

P0蛋白(IgM)ELISA试剂盒Torc2/Crtc2  CREB转录共激活因子TORC220 ul

P0蛋白(IgG)ELISA试剂盒Phospho-Torc2/Crtc2 (Ser171)  酸化CREB转录共激活因子TORC2100 ul

OJ/抗异亮氨酰tRNA合成酶(OJ/IleRS)ELISA试剂盒Morphine  100 ul
水泡病毒PCR检测试剂盒说明书凯尔血型糖蛋白CD238抗体Baicalein中文名：黄芩素别名：分子式：C15H10O5

血型抗原前体蛋白抗体Farrerol 7-O-glucoside中文名：别名：分子式：C23H26O10

癌易感基因2和p21蛋白抑制因子抗体Erythrinin H中文名：别名：分子式：C17H12O7

β2微球蛋白抗体(单抗)Epimedoside A中文名：别名：分子式：C32H38O15

β-连环蛋白/β-连环素/β链接素/β-catenin抗体Kaempferide中文名：素别名：3,5,7-Trihydroxy-4'-methoxyflavone； 山柰素分子式：C16H12O6
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。