详情介绍
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 人线粒体DNAPCR检测试剂盒价格 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7781 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
碲标准溶液(100μg/ml,基体:HCI)Phospho-SLP-76 (Ser376) (D7S1K) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)酸氢氨钠
铥标准溶液(1000µg/mL,基体:10%HCL)Phospho-SLP-76 (Ser376) (D7S1K) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)5,6-二氢-4H-吡咯并[3,2,1-IJ]喹啉
钒标准溶液(500mg/L,溶剂:水)FANCD2 (D5L5X) Rabbit mAb硝基-1,二硫酸盐
钒标准溶液(100mg/L,基体:1%HCI)HUS1 (D4J9H) Rabbit mAb5-溴-2-(硫代甲基)嘧啶
镱标准溶液(1000μg/ml)BCAT1 (D4V2T) Rabbit mAbN,N-二异基三盐
镱标准溶液(1000μg/ml in 10%HCl)Phospho-Met (Tyr1234/1235) Blocking Peptide4,5-二-2-甲基哒-酮
锌标准溶液(1000mg/L,溶剂:1%盐酸)Ibrutinib3,4',5-*氧基-反-二代
锌标准溶液(500mg/L,溶剂:1%盐酸)ROR1 (D6T8C) Rabbit mAb2-ACETAMIDO-BROMOANISOLE
二溴一标准溶液(1.0mg/ml,基体:甲)MUC1-C (D5K9I) XP® Rabbit mAb甲基-1-萘甲酸
2,二甲酚标准溶液(1000μg/ml,溶剂:甲)ERG (A7L1G) Rabbit mAb (PE Conjuga)METHYL IMIDAZO[1,2-A]PYRIDINE-5-CARBOXYLA
3,二甲酚标准溶液(1000μg/ml,溶剂:甲)TKS5 Antibody3,4'-二氨基二烷
邻二甲酸二酯标准溶液(1000μg/ml,溶剂:甲)TRPC6 (D3G1Q) Rabbit mAbN,N'-基双酰
邻二甲酸二丁酯标准溶液(1000μg/ml,溶剂:甲)Phospho-CaMKK2 (Ser495) Antibody双(2,2,6,6-四甲基-3,5-庚二酮)化铜
2,二溴酰标准溶液(490mg/L,基体:酸酯)Orexin (D6G9T) Rabbit mAb氧基
1,1-二烷标准溶液(1.00mg/ml,基体:甲)CaMKK2 (D8D4D) Rabbit mAb
反式-1,2-二标准溶液(1.00mg/ml,基体:甲)eIF4E (C46H6) Rabbit mAb (Biotinylad)7-甲氧基咪唑并[1,2-A]吡啶-8-甲
邻二甲酸二正壬酯标准溶液(136.0μg/ml,溶剂:甲)SIX1 (D5S2S) Rabbit mAb6-酰氧基正己酸甲酯
标准溶液(1000μg/ml,溶剂:二硫化碳)CAR (D3W3G) Rabbit mAb1-BOC-5-(METHOXYCARBONYL)INDOLE-2-BORONIC ACID
包虫IgG ELISA试剂盒Inhibin Beta C 抑制素βC20 ul
膀胱肿瘤抗原(BTA)ELISA试剂盒Insulin 胰岛素100 ul
膀胱癌抗原(UBC)ELISA试剂盒Insulin (pig) 胰岛素 (猪)100 ul
伴侣蛋白10(CPN10)ELISA试剂盒rInsulin 抗重组胰岛素100 ul
半糖凝集素-7(Gal-7)ELISA试剂盒rInsulin monoclonal (pig) 抗胰岛素(猪)100 ul
半糖(Galactose)ELISA试剂盒rInsulin human monoclonal 重组胰岛素100 ul
板层素相关多肽2亚型α(TMPO)ELISA试剂盒Insulin Receptor 胰岛素受体100 ul
瘢痕性天疱疮(CP)ELISA试剂盒Insulin Receptor alpha 胰岛素受体α100 ul
百日咳病毒(IgM)ELISA试剂盒Insulin Receptor Alpha 胰岛素受体α100 ul
人线粒体DNAPCR检测试剂盒价格细胞色素P450 19抗体Hirsutal中文名:别名:分子式:C19H22O6
16号染色体开放阅读框48抗体Ehretioside B中文名:别名:分子式:C14H177
间隙连接蛋白36抗体5-(6-Hydroxybenzofuran-2-yl)-2-(3-methylbut-1-enyl)benzene-1,3-diol中文名:别名:分子式:C19H18O4
12号染色体开放阅读框61抗体Resorcil中文名:别名:1,3-Benzenediol分子式:C6H6O2
12号染色体开放阅读框63抗体Moracin C中文名:桑辛素C别名:分子式:C19H18O4