注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
酸甲酯(色谱级)Nav1.5 (D9J7S) Rabbit mAb羧基哒

二甲酸酯(色谱级)Zap-70 (D1C10E) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)基噻吩

异戊烷(色谱级)c-Myc (D84C12) Rabbit mAb (Pacific Blue™ Conjuga)氨基-5-甲基吡啶

甲(色谱级)Ras (G12D Mutant Specific) (D8H7) Rabbit mAb正丁基

对甲酰(色谱级)SF3B1 (D7L5T) Rabbit mAb2-脱氧-2,2-二氟戊呋喃糖-1-酮 3,5-二安息香酸盐

硝烷(色谱级)CART (D6M2M) Rabbit mAb四(3,5-二叔丁基-羟基)酸季戊四酯

正辛烷(色谱级)LEF1 (C12A5) Rabbit mAb (PE Conjuga)1-环基哌

2-戊酮(色谱级)p38 MAPK (D13E1) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)6-甲基-2-基吡啶

戊酮(色谱级)EpCAM (D9S3P) Rabbit mAb (IHC Preferred)2,二氟三氟甲

正(色谱级)TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-氟-2-甲

正戊烷(色谱级)ELMO1 (D4K2E) Rabbit mAb5--2-甲酸

石油(色谱级)Phospho-PLCγ1 (Tyr783) (D6M9S) Rabbit mAb (PE Conjuga)2-溴-6-甲氧基甲酸

石油(色谱级)MPC1 (D2L9I) Rabbit mAbD-亮氨

石油(色谱级)BiP (C50B12) Rabbit mAb (PE Conjuga)2，二溴

三(色谱级)RAP80 (D1T6Q) Rabbit mAb5-甲氧基-2-

叔丁(色谱级)S6 Ribosomal Proin (5G10) Rabbit mAb (HRP Conjuga)硝地平

异辛烷(色谱级)ELL (D7N6U) Rabbit mAb2-喹噁啉

异辛烷(色谱级)E-Cadherin (4A2) Mouse mAb2-[(羟基氨基)亚氨基]-1-吡咯烷甲酸叔丁酯

第八因子相关抗原(FⅧAg)ELISA试剂盒HLA G  类白细胞抗原G20 ul

第10号染色体缺失并与张力蛋白同源的酸酶(PN/MMAC1)ELISA试剂盒HLA E  类白细胞抗原E100 ul

抵抗素样分子β(RELM-β)ELISA试剂盒HMGA1  高迁移率族蛋白A1100 ul

抵抗素(Resistin)ELISA试剂盒HMGA2  高迁移率族蛋白A2100 ul

低氧诱导因子3α(HIF-3α)ELISA试剂盒HMGB1  高迁移率族蛋白B1100 ul

低氧诱导因子2(HIF-2)ELISA试剂盒HMGB4  高迁移率族蛋白B4100 ul

低氧诱导因子1α(HIF-1α)ELISA试剂盒HNF1/LFB1/HNF1A  肝细胞核因子1α100 ul

低密度脂蛋白受体相关蛋白5(LRP-5)ELISA试剂盒Heme Oxygenase 1/HO-1  血红素氧合酶 1/热休克蛋白32100 ul

低密度脂蛋白受体相关蛋白4(LRP-4)(IgG)ELISA试剂盒Heme Oxygenase 1/HO-1  血红素氧合酶 1/热休克蛋白32100 ul
人Cosmc基因PCR检测试剂盒厂家EFHC1蛋白抗体N-Benzylcinchonidinium chloride中文名：N-苄基氯化辛可宁丁别名：分子式：C26H29ClN2O

EFHC2蛋白抗体4,4'-Biphenyldicarboxylic acid中文名：4,4'-联苯二甲酸别名：分子式：C14H10O4

EFHD1蛋白抗体9,9-Bis(4-ami-3-methylphenyl)fluorene中文名：9,9-双(4-氨基-3-甲苯基)芴别名：分子式：C27H24N2

突触结合蛋白2抗体4-Benzoyl-3-methyl-1-phenyl-5-pyrazolone中文名：4-苯甲酰基-3-甲基-1-苯基-5-吡唑啉酮别名：分子式：C17H14N2O2

表皮生长因子受体5抗体5-Benzyloxyindole中文名：5-苄氧基吲哚别名：分子式：C15H13
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。