详情介绍
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 犬细小病毒PCR检测试剂盒价格 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7745 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
环己烷(色谱级)OLFM4 (D1E4M) XP® Rabbit mAb2-基-3,5-二氟吡啶
二硫化碳(色谱级)Phospho-CDK Substra [pTPXK] (D9V5N) Rabbit mAb4,6-二甲氧基-2-(氧基羰基)氨基嘧啶
四化碳(色谱级)KPNA2 Antibody9,9-二[(羟氧基)基]芴
二甲基亚砜(色谱级)Gα(q) (D5V1B) Rabbit mAb3,二氢异喹啉-1(2H)-酮
N,N-二甲基酰(色谱级)Phospho-MAPK Substras Motif [PXpTP] MultiMab™ Rabbit mAb mix2-溴-1-(2,6-二)酮
邻二 ;1,2-二(色谱级)Torin 1(甲基)甲酸
二(色谱级)Pan Na Channel α Subunit (D2I9C) Rabbit mAb氧酸钠
二二二(色谱级)M-RIP (D9I5T) Rabbit mAb二二二甲基酸酯
二丁(色谱级)Torin 2基-1,磺酸内酯
(色谱级)FTO Antibody2--甲基-硝基吡啶
甲酸(色谱级)Phospho-Ser-Pro-Pro Motif [pSPP] Rabbit mAb2-氟-5-(三氟甲基)甲酰
正己烷(色谱级)SignalSilence® OSR1 siRNA I1,1-二溴-3,3,三氟酮
正庚烷(色谱级)PSMC2 (D5T1T) Rabbit mAb3,5-二甲酸甲酯
异辛烷(色谱级)M-RIP (D8G8R) Rabbit mAb5,6-二甲氧基-2-(吡啶基)亚甲基-1-茚酮
异(色谱级)Eg5 (E1L3W) Rabbit mAb3,5-吡啶二甲酸二酯
异(色谱级)NRF2 (D1Z9C) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)1-甲基-1H-咪唑-2-甲
二甲(色谱级)Mouse (G3A1) mAb IgG1 Isotype Control (Pacific Blue™ Conjuga)肉桂基
异丁(色谱级)Ras (G12V Mutant Specific) (D2H12) Rabbit mAbN-基异基
凋亡抑制因子3(BIRC4/API3)ELISA试剂盒T7 tag T7 tag标签100 ul
凋亡相关蛋白激酶(DAPK)ELISA试剂盒V5 tag V5 tag标签100 ul
凋亡相关半胱氨酸肽酶4(Casp4)ELISA试剂盒KT3 tag KT3 tag100 ul
凋亡蛋白酶激活因子1(APAF1)ELISA试剂盒VSV-G tag VSV-G tag标签100 ul
淀粉状蛋白β(A4)前体蛋白结合家族B成员1(FE65)ELISA试剂盒HIV gp120 艾滋病病毒100 ul
电子转运黄素蛋白-泛醌氧化还原酶/电子转运黄素蛋白脱氢酶(ETFDH)ELISA试剂盒HIV gp41 艾滋病病毒100 ul
电子转移黄素蛋白β肽(ETFB)ELISA试剂盒HIV-1 ENV(gp160) 艾滋病病毒-1包膜糖蛋白20 ul
电压门控通道(VGKC-ab)ELISA试剂盒HIV-1 ENV (gp160) 艾滋病病毒-1包膜糖蛋白100 ul
电压门控通道(VGKC)ELISA试剂盒HLA-DR HLA-DR100 ul
犬细小病毒PCR检测试剂盒价格DHX螺旋酶抗体Lycoclaval中文名:别名:14-Serratene-3,21,24-triol分子式:C30H50O3
肌营养蛋白α抗体Niloticin中文名:尼洛替星别名:24,25-Epoxy-23-hydroxytirucall-7-en-3-one分子式:C30H48O3
视神经细胞相关蛋白/早老素结合蛋白抗体Simiarel中文名:西米杜鹃醇别名:5-Adianen-3-ol分子式:C30H50O
胞质分裂专一蛋白7抗体Ursolic acid中文名:熊果酸别名:3-Hydroxy-12-ursen-28-oic acid;乌苏酸分子式:C30H48O3
环指蛋白19抗体3β-Acetoxyurs-11-en-28,13β-olide中文名:别名:分子式:C32H48O4