注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
甲合次硫酸氢钠(>98%，BC)Phospho-BMAL1 (Ser42) Antibody2--氟

酸性品红钙(>60%，BS)Symmetric Di-Methyl Histone H3 (Arg8) (E1W5H) Rabbit mAb(2-羟基)酸

加拉铵(>98%,BR)Acetyl-Histone H4 (Lys12) (D2W6O) Rabbit mAb氧化

D-氨基葡萄糖硫酸钠盐INTS9 Antibody氢醌

葡萄糖-6-酸脱氢酶Na Channel β1 Subunit (D4Z2N) Rabbit mAb吗啉酸盐酸盐

戊二酸(>98%,BR)Prestained Proin Marker4'-氟-2-羟基酮

戊二酸酐(>96%,BR)Prestained Proin Marker2--4,6-二基嘧啶

三醋酸甘油酯(>98%,BR)Prestained Proin Marker7-溴-1H-吲唑

甘氨酸钠(>98%,BR)DEK (E1L3V) Rabbit mAb甲基吡啶-N-氧化物

酸(>98%,BR)Na Channel β2 Subunit (D6L5Y) Rabbit mAb1-基环戊

硬脂酸单甘油酯(>98%,BR)Tri-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAbN-[基-(三氟甲基)基]甲基环氧酰

化金Tri-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D4W1U) Rabbit mAb(2S)-(+)-缩水甘油基对甲磺酸酯

石墨粉(>99%,BR)LMAN1 (E2B6H) Rabbit mAb硝基-溴

硝酸胍(分子生物学级)MDR1/ABCB1 (E1Y7S) Rabbit mAb溴丁

己二(>98%，BR)Claudin-1 (D3H7C) Rabbit mAb2-基-4,5-咪唑二羧酸二甲酯

六甲基酰三(>98%,BR)Viperin (D5T2X) Rabbit mAbN-基正丁

还原茚三酮二水合物(>98%,BR)Acetyl-Histone H3 (Lys18) (D8Z5H) Rabbit mAb6-氧基-2-巯基并噻唑

(>40%,BC)Phospho-CREB (Ser133) (87G3) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)2-氟苄基肼

富组氨酸糖蛋白(HRG)ELISA试剂盒HBA1/Alpha globin  血红蛋白α1100 ul

富亮氨酸α2糖蛋白1(LRG1)ELISA试剂盒hHb  血红蛋白100 ul

富含半胱氨酸蛋白61(Cyr61/CCN1)ELISA试剂盒HBsAg  肝表面抗原100 ul

副肿瘤性天疱疮(PNP)ELISA试剂盒HBsAg  型肝炎表面抗原（检测）100 ul

复制蛋白A(RPA-70)ELISA试剂盒HBcAg  型肝炎核心抗原100 ug

附睾蛋白4(HE4)ELISA试剂盒HBeAg(1)  肝e抗原（1）100 ul

辅酶Q10(CoQ10)ELISA试剂盒HBeAg(2)  型肝炎e抗原（2）100 ul

脯氨酸肽酶(PEPD)ELISA试剂盒VWCE  VWCE100 ul

脯氨酸羟化酶(PHD)ELISA试剂盒VWCE  VWCE100 ul
禽结核杆菌PCR检测试剂盒规格卷曲螺旋结构域蛋白37抗体Juncusol 2-O-glucoside中文名：别名：分子式：C24H28O7

卷曲螺旋结构域蛋白17抗体Ethyl brevifolincarboxylate中文名：短叶苏木酚酸乙酯别名：分子式：C15H12O8

卷曲螺旋结构域蛋白58抗体cis-Martyside中文名：顺式地黄苷别名：分子式：C31H40O15

卷曲螺旋结构域蛋白94抗体Gnetifolin E中文名：别名：分子式：C21H24O9

卷曲螺旋结构域蛋白82抗体2',6'-Dihydroxy-4'- methoxy-3'-methylacetophene中文名：别名：分子式：C10H12O4
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。