详情介绍
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 牛呼吸道合胞病毒PCR检测试剂盒说明书 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7711 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
三氧化二铬(>99%,BR)CD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAb溴-2-硝基三氟
四氧化三钴(>99%,BR)CD71 (D7G9X) XP® Rabbit mAb甲酸酯
酸钴四水(>99.5%,BR)UVRAG (D2Q1Z) Rabbit mAb甲酰-2-酸酯
钴粉(>99%,BR)N-Cadherin (D4R1H) XP® Rabbit mAb氧基甲酸
铜粉(>99.5%,BR)N-Cadherin (D4R1H) XP® Rabbit mAb2-甲基-5-磺酰
式碳酸铜(铜纯度:52.5~56.5%)LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb (Biotinylad)2-氟
氧化铜粉(>99%,BR)LSm2 (D9X6C) Rabbit mAb十二烷基噻吩
焦铜iNOS (D6B6S) Rabbit mAb2,二羟基-甲
铜三水(>98%,BR)Phospho-SQSTM1/p62 (Thr269/Ser272) Antibody5-溴-甲基-1H-吲唑
2'-脱氧腺苷5'二酸三钠盐(>97%,BR)PFKFB3 (D7H4Q) Rabbit mAb酰基-7(1H)-氮杂吲哚
2'-脱氧胞苷-5'-二酸三钠盐(分子生物学级)PathScan® Phospho-HER4/ErbB4 (panTyr) Sandwich ELISA Kit2-溴-1,二-5-氟
(>98%,BR)IFITM1 Antibody酸
DMPPathScan® Total HIF-1α Sandwich ELISA Kit8-硝基喹啉
没食子酸月桂酯(>98.5%,BR)Phospho-FoxO3a (Ser253) (D18H8) Rabbit mAb氨基-5-三氟甲
dUMP;2'-脱氧尿苷-5'-酸二钠盐MT1-MMP (D1E4) Rabbit mAb2-溴-6-并噻唑
盐酸盐(>98%,BR)MMP-2 (D8N9Y) Rabbit mAb1-己基-2,二甲基咪唑三氟甲磺酸盐
呋喃三二钠盐TRF2 (D1Y5D) Rabbit mAb苄基二膦
吲哚基-beta-D-吡喃葡萄糖苷(>98%,BR)SignalSilence® IRF-7 siRNA I5-溴-2-甲氧基甲
环酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒TBX2/T-box2 血栓素B2(一种新发现的抑癌基因)100 ul
环酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒FSH receptor 促卵泡刺激素受体100 ul
环加氧酶2(COX-2)ELISA试剂盒Follistatin 卵泡抑素100 ul
踝蛋白(talin)ELISA试剂盒FSP/Spastin 纤维母细胞表面蛋白100 ul
花生四酸5脂氧合酶(ALOX5/LOG5)ELISA试剂盒FSH 促卵泡刺激素100 ul
花生四酸15脂加氧酶(ALOX15/LOG15)ELISA试剂盒FHIT 脆性组氨酸三联体20 ul
花生四酸12 - 脂氧合酶,12S型(ALOX12/LOG12)ELISA试剂盒Phospho-FHIT (Tyr114) 酸化脆性组氨酸三联体500 ul
花生四酸(AA)ELISA试剂盒G proin beta subunit GI G蛋白/鸟苷酸结合蛋白100 ul
琥珀酰辅酶A合成酶(SCS)ELISA试剂盒SLK/Fyn 酪氨酸蛋白激酶Fyn(同步原癌基因)1 Kit
牛呼吸道合胞病毒PCR检测试剂盒说明书肌动蛋白结合蛋白LIM蛋白3抗体Tyramine hydrochloride中文名:酪胺盐酸盐别名:分子式:C8H12
磷酸化CD156b抗体Trolline中文名:金莲花碱别名:(±)-Trolline分子式:C12H133
乙醇脱氢酶5抗体5-Carboxystrictosidine中文名:别名:(5S)-5-Carboxystrictosidine分子式:C28H34N2O11
乙醇脱氢酶6抗体4,5-Dihydropiperlonguminine中文名:二氢荜茇明宁碱别名:Dihydropiperlonguminine分子式:C16H213
遗传性失明相关蛋白AIPL1抗体14-O-Acetylneoline中文名:14-O-乙酰基尼奥宁别名:14-Acetylneoline; Bullatine C分子式:C26H417