注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
氧化镧(>99%,EP)LAMTOR4/C7orf59 (D4P6O) Rabbit mAb(R)-氨基四盐酸盐

化镁六水(分子生物学)SOD2 (D3X8F) XP® Rabbit mAbL-2,二氨酸

醋酸锰四水SOD2 (D3X8F) XP® Rabbit mAb阿替洛尔

锰屑(>99%,BR)Neurogenin 2 (D2R3D) Rabbit mAb-2-氟吡啶

锰粉(>99%,BR)Phospho-p44/42 MAPK (Erk1/2) (Thr202/Tyr204) (197G2) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)-5-氟基酸

6-(马来酰亚基)己酸琥珀酰亚酯VAMP1 Antibody邻氧酸

神经氨酸酶(≥10 units/ mg )PathScan® Phospho-Rb (Ser807/811) Sandwich ELISA Kit环匹罗司

酸镍四水(>98%,BC)Phospho-Atg14 (Ser29) Antibody2-基-吡啶甲

尼罗红(>95%,BS)NLRP3 (D2P5E) Rabbit mAb甲氢睾酮

N-基脲(>97%,BR)NT5E/CD73 (D7F9A) Rabbit mAbN,N'-撑双硬脂酰

软海绵酸(>95.0%,BC)S100A6 (D3H3W) Rabbit mAb氟-2-甲

软海绵酸钠(>95.0%,BC)CRABP1 (D7F9T) Rabbit mAb2-苄

邻二甲酸酐(>98%.BC)Ingrin β3 (D7X3P) XP® Rabbit mAb甲基异喹啉

结晶碳酸(>98%,BR)Ingrin β3 (D7X3P) XP® Rabbit mAb1-环基-2-(2-氟基)酮

焦酸(>97%,BC)Phospho-GIT2 (Tyr592) (D6L1J) Rabbit mAb2-基酚钠四水合物

钨酸二水(>98%,BR)PREX1 (D8O8D) Rabbit mAb对溴基联

对甲磺酰(>98%,BR)RBBP5 (D3I6P) Rabbit mAb5-甲基-硝基-1H-吡唑

硫酸奎宁水合物(>98%,BR)LC3A/B (D3U4C) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)-甲

红细胞原卟啉(EP)ELISA试剂盒GABA  兔抗γ1氨基丁酸100 ul

红细胞生成素受体(EPOR)ELISA试剂盒Gab1  接头蛋白Gab 11 Kit

红细胞生成素(EPO)ELISA试剂盒Phospho-Gab1 (Tyr627)  酸化接头蛋白Gab 1100 ul

横纹肌辅肌动蛋白α(sm Actinin-α )ELISA试剂盒Phospho-Gab1 (Tyr659)  酸化接头蛋白Gab 1100 ul

亨廷顿相关蛋白1(HAP1)ELISA试剂盒Gab2  接头蛋白Gab 2100 ul

黑色素细胞(MC Ab)ELISA试剂盒phospho-GAB2(Ser623)  酸化接头蛋白Gab220 ul

黑色素浓缩激素(MCH)ELISA试剂盒phospho-GAB2 (Tyr452)  酸化接头蛋白Gab 2100 ul

黑色素瘤相关抗原D4(MAGED4/MAGED4B)ELISA试剂盒phospho-GAB2 (Tyr643)  酸化接头蛋白Gab2100 ul

黑色素瘤活性抑制蛋白(MIA)ELISA试剂盒phospho-GAB2 (Ser623)  酸化接头蛋白Gab 2100 ul
牛结核病PCR检测试剂盒规格交联纤维蛋白二聚体抗体Ethopabate中文名：乙氧酰胺苯甲酯别名：分子式：C12H154

多巴胺转运蛋白DAT抗体Nicarbazin中文名：尼卡巴嗪别名：分子式：C19H18N6O6

核心蛋白聚糖抗体Ketoprofen中文名：酮基布洛芬别名：分子式：C16H14O3

多巴胺受体D3抗体Phenformin hydrochloride中文名：盐酸苯乙双胍别名：分子式：C10H16ClN5

诱捕受体3抗体Dinitolmide中文名：二硝托胺别名：分子式：C8H7N3O5
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。