注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
化铷(分子生物学级)Vitamin D3 Receptor (D2K6W) Rabbit mAb2-基酰基

多聚赖氨酸mGluR1 (D5H10) Rabbit mAb2,2,2-三氟酰

司班80;司盘80c-Raf (D5X6R) Mouse mAb2-溴-5-氟溴苄

聚二1000RUNX2 (D1L7F) Rabbit mAb2,6-二甲

胰蛋白胨(BD)SimpleChIP® Human PMAIP1 Intron 1 Primers氨基-2,5-二氟甲

丹磺酰MRP2/ABCC2 (D9F9E) Rabbit mAb溴-2,5-二氟

N-基顺二酰亚Phospho-Chk2 (Thr68) Blocking Peptide1,二氮杂环庚烷-1-甲酸叔丁酯

碳酸氢(AR)EphB6 Antibody2-甲基-戊氧基酸

十二烷基磺酸钠(BR)Rab7 (D95F2) XP® Rabbit mAb (HRP Conjuga)2--基吡啶

茶Exportin 5 (D7W6W) Rabbit mAb5-溴-2-氟酚

纤维素酶Phospho-Vimentin (Ser83) (D5A2D) Rabbit mAb氟

硫酸软骨素Phospho-p53 (Ser15) (D4S1H) Rabbit mAb (Rodent Specific)羟基-2-甲基吡啶

异烟酸Phospho-p53 (Ser15) (D4S1H) Rabbit mAb (Rodent Specific)2--氟-5-硝

L-苹果酸Phospho-p53 (Ser15) (D4S1H) Rabbit mAb (Rodent Specific)2-氨基磺酰基-N,N二甲基烟酰

蛋白酶K溶液(20 mg/ml)LIN28A (D1A1A) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjuga)N,N-二甲基甘氨酸

多聚赖氨酸0.1%溶液DAG Lipase β (D4P7C) Rabbit mAb2-溴-氟

盐酸四环素溶液,50 mg/mlE-Ras (D5G5J) Rabbit mAb2--5-基嘧啶

8-羟基喹啉硫酸盐(植物细胞培养级)Cleaved Histone H3 (Thr22) (D7J2K) Rabbit mAb2-硝基-甲砜基甲酸

豚鼠Ⅱ型肺泡细胞表面抗原(KL-6)ELISA试剂盒sFRP-4  内膜100 ul

豚鼠25羟基维生素D3(25 HVD3)ELISA试剂盒Endostatin  内皮抑素/内皮他丁100 ul

山羊ELISA试剂盒Endo G  核酸内切酶G100 ul

山羊甲状旁腺激素(PTH)ELISA试剂盒beta endorphin  β-内啡肽100 ul

山羊黄体生成素(LH)ELISA试剂盒envelope glycoproin (Yellow fever virus)  黄热病毒包膜糖蛋白100 ul

山羊氧化酶(XOD)ELISA试剂盒ENPP1/PC-1  核苷酸内焦酸酶/酸二酯酶1100 ul

山羊还原型谷胱甘肽(GSH)ELISA试剂盒ENPP3/CD203c  ENPP3IgG100 ul

山羊过氧化氢酶(CAT)ELISA试剂盒EpCAM/CD326  上皮细胞粘附分子100 ul

山羊骨形成蛋白2(BMP-2)ELISA试剂盒E.coli O6  大肠杆菌埃希杆菌O6（肠致病性大肠杆菌O6）100 ul
梅毒螺旋体PCR检测试剂盒厂家整合素样金属蛋白酶与凝血酶样3蛋白抗体Neorauflavene中文名：别名：分子式：C21H20O5

去整合素样金属蛋白酶20抗体Sanggen N中文名：别名：分子式：C25H26O6

去整合素样金属蛋白酶23抗体Dodonaflavol中文名：别名：分子式：C28H32O9

去整合素样金属蛋白酶28抗体Glepidotin B中文名：别名：分子式：C20H20O5

去整合素样金属蛋白酶32抗体3,6-Dimethoxyapigenin中文名：3,6-二甲氧基芹菜素别名：分子式：C17H14O7
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。