​
注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
甘草素（消旋）SimpleChIP® Human c-Fos Exon 3 Primers2--(三氟甲基)甲

芹糖甘草苷；甘草苷元-7-O-D-芹糖-4’-O-D-葡萄糖苷CHD4 (D4B7) Rabbit mAb吲哚-7-甲酸甲酯

芹糖异甘草苷；异甘草苷芹糖Everolimus溴苄

白屈菜红(标准品）ADRM1 (D9Z1U) Rabbit mAb2--氟苄

TAE684Vimentin (D21H3) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)7-甲基吲哚

青蒿酸(标准品)Smurf2 (D8B8) Rabbit mAb溴-1H-吡咯-2-羧酸甲酯

防己诺林FoxK1 Antibody甲酸 2-萘酯

澳茄新Phospho-cdc25C (Thr48) (D2H3) Rabbit mAb6-甲基-2-吡啶甲酸

五水合硫酸金雀花/硫酸鹰爪豆(标准品)TRXR2/TXNRD2 (3F2-E12-F10) Mouse mAb水杨酰肼

五水合硫酸金雀花/硫酸鹰爪豆Phospho-p90RSK (Ser380) (D5D8) Rabbit mAb2-溴-甲酸

N-甲基金雀花氢酸盐ALDH1A1 (D4R9V) Rabbit mAb2--甲基吡

辛弗林(标准品)Upf1 (D15G6) Rabbit mAb代酮

辛弗林Glucocorticoid Receptor (D6H2L) XP® Rabbit mAb2'--N-酰酰

辛弗林盐酸盐Glucocorticoid Receptor (D6H2L) XP® Rabbit mAb8-甲氧基喹啉

三尖杉宁(标准品）Sec24B (D7D6S) Rabbit mAb(三氟甲氧基)

吉莫斯特;吉美嘧啶(标准品)SignalSilence® Atg13 siRNA I2-溴甲基萘

吉莫斯特;吉美嘧啶EREG (D4O5I) Rabbit mAb2-甲基-5-甲

蝙蝠葛诺林(标准品)Smad2/3 Control Cell Extracts-2-氟

Ⅱ型胶原(Col Ⅱ)ELISA试剂盒CYP21  胆固醇21-羟化酶100 ul

25羟基维生素D3(25 HVD3)ELISA试剂盒CYP2C19  细胞色素P450 2C19100 ul

25羟基胆固(25-OHC)ELISA试剂盒CYP450  细胞色素P450单氧化酶100 ul

20S蛋白酶体(20SP)ELISA试剂盒Cyr61/IGFBP10/CCN1  富半胱氨酸肝素结合蛋白61100 ul

Ⅰ型前胶原羧基端肽(PⅠCP)ELISA试剂盒CYP2E1  抗细胞色素P450ⅡE120 ul

Ⅰ型前胶原N端前肽(PⅠNP)ELISA试剂盒Cytochrome C  细胞色素 C100 ul

Ⅰ型胶原N末端肽(NTX)ELISA试剂盒Phospho-Dab1 (Tyr220)   酸化Disabled 1100 ul

Ⅰ型胶原C端肽(CTX-Ⅰ)ELISA试剂盒Phospho-Dab1 (Tyr232)  酸化Disabled 1100 ul

Ⅰ型胶原(Col Ⅰ) ELISA试剂盒Phospho-Dab1 (Ser491)  酸化Disabled 1100 ul
驴特定基因序列PCR检测试剂盒价格钙/钙调素依赖蛋白激酶2α抗体o-Hydroxycinnamaldehyde中文名：别名：3-(2-Hydroxyphenyl)acrylaldehyde分子式：C9H8O2

周期蛋白结合蛋白抗体trans-4-Hydroxycinnamic acid中文名：反式对羟基肉桂酸别名：反式对羟基桂皮酸分子式：C9H8O3

钙通道L型α2多肽抗体Syringin pentaacetate中文名：别名：分子式：C27H34O14

L型电压依赖型钙通道β3(L-type Ca++ CPβ3)抗体Sinapaldehyde中文名：芥子醛别名：分子式：C11H12O4

L型电压依赖型钙通道β4抗体Ferulamide中文名：别名：4-Hydroxy-3-methoxycinnamamide分子式：C10H113