注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Terpineol3- 99%2-甲基丁基乙酸酯 99%

THFA异烟碱 99%2-甲基丁基乙酸酯 99%, Kosher

Cyclopental2-噻吩 97%甲基庚烯酮 98%

2-Octal劳森试剂 97%2-甲基丁酸2-甲基丁酯  97%

Pentaerythritol3-硫酚 97%2-甲基丁酸2-甲基丁酯  ≥97%, Kosher, FG

Squalane4-巯基苯甲酸 99%二甲基丁酸叶酯 98%

1,2,3-Tribromopropane4-(甲硫基)苯酚 98%异丁酸麦芽酚酯 98%

1,1,3,3-Tetraethoxypropane2-硫酚 97%异丁酸麦芽酚酯 ≥98%, FG

DAM2-甲氧基苯硫酚 97%乙酸对甲基苄酯 98%

Diphenylmethane3-甲氧基苯硫酚 98%2-甲基戊酸 ≥98%, FCC, FG

Triphenylmethane4-甲氧基苯硫酚 98%4-甲基戊酸 98%

Decahydronaphthalene4-甲硫基苯硫酚 96%4-甲基戊酸 ≥98%, FCC, FG

1-Bromoheptane2-羟基苯硫酚 98%4-乙烯基愈疮木酚  ≥98%，Kosher

1-Bromooctane3-羟基苯硫酚 96%乙酸辛酯 98%

1-Bromohexadecane4-羟基苯硫酚 97%乙酸辛酯 ≥98%, FCC, FG

1-Chlorohexadecane4-甲氧基苄硫 98%E-2-辛烯 95%

氟胺菊酯标准溶液(100μg/ml,u=3%)MCM7 (D10A11) XP® Rabbit mAbLHR/CGR  促黄体生成素受体抗体

非草隆(标准品)TNF-R1 (C25C1) Rabbit mAbLHR/CGR  促黄体生成素受体抗体

(标准品)TNF-R1 (C25C1) Rabbit mAbLH beta  促黄体生成素抗体

丁硫溶液(1.00mg/ml)PHF8 (E9R4F) Rabbit mAbLH  人促黄体生成素抗体

丁硫溶液(100μg/ml,u=3%)SUZ12 (D39F6) XP® Rabbit mAbLH  促黄体生成素抗体

丁硫溶液(10μg/ml,u=4%)SUZ12 (D39F6) XP® Rabbit mAbLGR4/GPR48  G蛋白偶联受体48抗体

(B9)(标准品)Beclin-1 AntibodyLGI4  含亮氨酸神经胶质瘤失活蛋白4抗体

避蚊胺(99%)Myc-Tag (9B11) Mouse mAb (PE Conjugate)LGI1/ETL1  富含亮氨酸胶质瘤失活蛋白1抗体

标准溶液(1.00mg/mL,基体：甲)SDF1 AntibodyLGALS3BP  可溶性半乳糖凝集素3结合蛋白抗体

1,3-二氯烯(标准品)Cyclin D2 (D52F9) Rabbit mAbLFABP/FABP-2  肝脏型脂肪酸结合蛋白抗体
肠道病毒EV PCR检测试剂盒说明书G蛋白偶联受体γ3抗体Ethyl β-D-apiofuraside中文名：别名：分子式：C7H14O5

G蛋白偶联受体γ7抗体Myricadenin A中文名：别名：4,2',6'-Tri-O-p-coumaroylsucrose分子式：C39H40O17

G蛋白结合蛋白α13/Gα13抗体Loroglossin中文名：别名：分子式：C34H46O18

AF350标记的G蛋白结合蛋白α16/Gα16抗体6-O-(p-Hydroxybenzoyl)glucose中文名：6-O-对羟基苯甲酰葡萄糖别名：分子式：C13H16O8

G蛋白α抑制剂抗体Cerebroside D中文名：脑苷脂D别名：分子式：C43H819
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。