注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
Chlorobutal4-氟苯硫酚 98%桂酸异酯 ≥96%, FG

2-Ethyl-1-butal4-氟苯基乙硫 96%可可 ≥95%，Kosher

Cinnamyl alcohol2-氟茴香硫 98%可可 95%

1-nal4-氟硫代苯甲 97%丁香酚甲 98%

2-nall2-氟硫代苯甲酰胺 98%异丁香酚甲 99%

1-Octadecal4-氟苯基异硫酸酯 98%异丁香酚甲 ≥98%,FCC

1-Hexadecal4－氟苯硫脲 99%2-甲基庚酸  98%

1-Pentadecal4-(4-氟苯甲酰基)丁酸 98%乙酸薄荷酯  98%

Tetradecal糠基硫 98%5-甲基-2-苯基-2-己烯 95%

Cyclohexal4-羟基硫代苯甲酰胺 98%5-甲基-2-苯基-2-己烯 ≥95%, Kosher, FG

2,5-Dimethylcyclohexal4-羟基-3-乙酮 98%3-甲硫基 98%

3,5-Dimethyl-3-hexal3-吡啶 98%3-甲基戊酸 99%

3-Methylcyclohexal对异基苯酚 98%3-甲基戊酸 ≥98%, FG

Farnesol4-异基苯硫酚 96%乙酸薄荷酯  ≥98%, FCC

1-Heptal2-异基苯硫酚 90%2-甲基-4-戊烯酸 98%

n-Octal2--5-甲基噻吩 97%2-甲基-4-戊烯酸 ≥98%，FCC

多氯联苯 (Aroclor 1254)标样(100μg/mL,基体:甲)TNF-R2 AntibodyLIMS1  整合素和生长因子样蛋白1抗体

甲基毒死蜱标准溶液(10μg/ml,u=6～4%,酮)TNF-R2 AntibodyLIMK1  单丝氨酸蛋白激酶1抗体

解毒喹(标准品)Sox2 (C70B1) Rabbit mAb (IHC Preferred)LILRB3/CD85a/PirB  白细胞免疫球蛋白样受体-B抗体

绿麦隆标准溶液(100μg/ml,u=4%)OSR1 AntibodyLigamentum Nuchae Elastin  项韧带弹性蛋白抗体

氯丹溶液(基体：异辛烷)Caspr2 AntibodyLIFR/CD118  白血病抑制因子受体抗体

敌草隆(99%)GP130 AntibodyLIF  白血病抑制因子抗体

二溴磷(标准品)Phospho-MLKL (Ser345) (D6E3G) Rabbit mAbLI-cadherin  肝肠钙粘连蛋白抗体

氟氯菊酯标准溶液(10μg/ml,u=5%,基体：正己烷)NPRL2 (D8K3X) Rabbit mAbLHX6  转录因子LHX6抗体

四螨(分析标准品,98.6%)NF-κB2 p100/p52 (D7A9K) Rabbit mAbLHX2  调控胚胎干细胞分化蛋白Lhx2抗体

四聚乙(97%)MCM7 (D10A11) XP® Rabbit mAbLHRH/GNRH  黄体激素释放激素类似物抗体
产气荚膜梭菌PCR检测试剂盒厂家环化核苷酸调控阳离子通道蛋白亚型2/4抗体Triptobenzene H中文名：别名：Hypoglic acid分子式：C21H28O4

神经保护肽HN抗体Paniculoside III中文名：别名：分子式：C26H38O9

类白细胞抗原B272-Acetoxy-3-deacetoxycaesaldekarin E中文名：别名：分子式：C24H30O6

肌侧索硬化症相关蛋白HECW1抗体Methyl 7β,15-dihydroxydehydroabietate中文名：别名：分子式：C21H30O4

3-羟氨苯甲酸双加氧酶抗体Taxagifine中文名：别名：分子式：C37H44O13
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。