详情介绍
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 蚕微粒子病PCR检测试剂盒厂家 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7510 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
DBPC2,2'-二硫二吡啶 98%乙偶姻 97%
o-Cresol二苄基硫 99%乙偶姻 分析标准品,单聚体
Guanidine hydrochloride2,5-二溴 98%乙偶姻 Natural,≥96%(GC), FCC
DPG2,5-二溴噻吩 96%丁酸正戊酯 99%
Guanidine carbonate4,4-二甲氧基-2-丁酮 95%丁酸正戊酯 ≥99%, Kosher
Isophorone4,4'-二氨基二苯硫 98%2,3-丁二酮 98%
Rotene3,4-二溴噻吩 97%2,3-丁二酮 standard for GC, ≥99.0% (GC)
Corticosterone2,5-二氯噻吩 98%2,3-丁二酮 分析标准品,≥99.0% (GC)
MBTH Hydrochloride2,4-二氟苯硫酚 97%2,3-丁二酮 Natural,≥99%, FCC
PVPP3,4-二氟苯硫酚 96%正丁 >99.5%(GC)
1,3-Dihydroxyacetone dimmer2,3-二氯苯硫酚 97%正丁 ACS, ≥99.4%
4-Amiantipyrine2,4-二氯苯硫酚 97%乙酸丁酯 ≥99%, FCC
Cyclohexane2,5-二氯苯硫酚 98%乙酸丁酯 natural, ≥98%, FCC
Acetophene3,5-二氯苯硫酚 97%乙酸桂酯 97%
3'-Amiacetophene2,4-二硫酚 95%乙酸桂酯 ≥98%, FCC
Benzanthrone2,5-二硫酚 98%桂酸桂酯 ≥98%,Kosher
喹硫磷(分析标准品,99.8%)p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAbLpin1 protein Lpin1 抗体
二氯喹啉酸(分析标准品,98%)p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAbLPAP 淋巴细胞磷蛋白磷酸酶相关蛋白抗体
苯基三氯化锡(标准品)MyD88 AntibodyLOXL4 赖氨酰氧化酶样蛋白4抗体
标准溶液(100μg/ml,u=4%)β-Actin (8H10D10) Mouse mAbLOXL2 赖氨酰氧化酶相关蛋白2抗体
标准溶液(10μg/ml,u=6%)β-Actin (8H10D10) Mouse mAbLOX-1/OLR1 凝集素样氧化型低密度脂蛋白受体抗体
标准溶液(1000μg/ml,溶剂:甲)TRAIL (C92B9) Rabbit mAb (PE Conjugate)LONP1 线粒体离子肽酶1抗体
威标准溶液(10μg/ml,u=4%)GRB10 Antibodyl-Myc Myc基因肺癌相关蛋白抗体
吡嘧磺隆(分析标准品,99%)Phospho-SHP-2 (Tyr580) AntibodyLMW Kinigen/Kinigen 1 低分子量生长促进因子抗体(激肽原1)
草胺(分析标准品,97.5%)ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAbLMP7 低分子量蛋白酶体7抗体
草胺标准溶液(10μg/ml,u=2%)ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAbLMP7 低分子量蛋白7抗体
蚕微粒子病PCR检测试剂盒厂家内吞作用辅助蛋白EPN2抗体(S)-(+)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidine中文名:(S)-(+)-4-苄基-3-丙酰-2-恶唑烷酮别名:分子式:C13H153
内质网定位蛋白ERGI3抗体5-Benzyl D-glutamate中文名:D-谷氨酸5-苯甲酯别名:分子式:C12H154
内质网氧化物蛋白Ero1-Lα抗体(R)-(-)-4-Benzyl-3-propionyl-2-oxazolidine中文名:(R)-(-)-4-苄基-3-丙酰基-2-恶唑烷酮别名:分子式:C13H153
内质网蛋白ERp19抗体N-Benzoyl-L-tyrosine ethyl ester中文名:N-苯甲酰基-L-酪氨酸乙酯别名:分子式:C18H194
内质网蛋白ERp72抗体9-(1H-Benzotriazol-1-ylmethyl)-9H-carbazole中文名:9-(1H-苯并三唑-1-基甲基)-9H-咔唑别名:分子式:C19H14N4