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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 单端孢霉属通用PCR检测试剂盒价格 |
英文名称 | Trichothecium spp.PCR |
货号 | LZP7421 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
Piperacillin sodium salt溴代正癸烷 AR,98%α-氯糖 98%,amer ca 15%
Nalidixic acid溴代十二烷 98%纤维二糖 98%
Erythromycin ethyl succinate对溴氯苯 99%纤维二糖 分析标准品
Abamectin对溴氯苯 分析标准品,≥99.5% (GC)2-氯-4--alpha-L-岩藻糖苷 98%
Pyrazinecarboxamide(2-溴乙基)苯 98%甜 99%
Cyclosporin A1-溴十八烷 97%十二烷基-β-D-麦芽糖苷 99%
Ribostamycin Sulfate salt1-溴-2-氯乙烷 98%2-脱氧-D-核糖 98%
Piperacillin1-溴-3-氯苯 99%二硫苏糖 用于分子生物学, ≥99%
Dyclonine hydrochloride对溴苯甲 99%三磷酸脱氧胞苷钠盐 98%
Bialaphos溴代十六烷 97%N,N'-二异基碳二酰亚胺 98%
LY-237216溴代异烷 99%1,4-丁二胺双盐酸盐 99%
5-Fluorouracil溴代仲丁烷 CP1,2:3,5-双-O-异亚基-alpha-D-呋喃木糖 98%
Plicamycin溴代仲丁烷 98%双酮-D-甘露糖 97%
Mycophelic acid1-溴庚烷 98%(R)-2,5-二氢-3,6-二甲氧基-2-异基吡 97%
Phleomycin from Streptomyces verticillus溴代环己烷 98%(S)-2,5-二氢-3,6-二甲氧基-2-异基吡 97%
Validamycin1-溴-4-氯丁烷 98%2'-脱氧胸苷-5'-三磷酸三钠,二 96%
正(Standard for GC,≥99.8%(GC))HSPB8/HSP22 AntibodyNFKB p65 细胞核因子/k基因结合核因子抗体
酸(standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-NaNFKB p52/NFKB2 细胞核因子/k基因结合核因子 p52/p100抗体
正戊烷(Standard for GC,≥99.5%(GC))Phospho-PDK1 (Ser241) AntibodyNFkB p105/p50 细胞核因子p50/k基因结合核因子抗体
α-蒎烯(Standard for GC,≥99.0%)Phospho-PDK1 (Ser241) AntibodyNFkB p100/p52 细胞核因子p100/p52k基因结合核因子抗体
酸酯(Standard for GC,≥99.5%(GC))PDK1 AntibodyNFIC 核因子1C型抗体
五氯苯硫酚(标准品)PDK1 AntibodyNF-H/Neurofilament H/Neurofilament 200 高分子量神经丝蛋白抗体
磷酸(Standard for GC, ≥99% (GC))Phospho-ATR (Thr1989) (D5K8W) Rabbit mAbNFEM5/IRF4/MUM1 淋巴细胞特异性干扰素调节因子抗体
(Standard for GC,≥99.5%(GC))Akt2 (D6G4) Rabbit mAbNFBD1/MDC1 DNA损伤关卡蛋白1抗体
硬脂酸(Standard for GC,>99%(GC))Akt2 (D6G4) Rabbit mAbNF-ATc4 T细胞激活核转录因子4抗体
苯乙烯(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-IRS-1 (Tyr1222) AntibodyNFATc1/NFAT2 活化T细胞核因子1蛋白抗体
单端孢霉属通用PCR检测试剂盒价格戊二酰辅酶A脱氢酶抗体Panaxydiol中文名:别名:分子式:C17H24O2
GTP环反馈调节蛋白抗体Falcaril中文名:别名:分子式:C17H24O
绒毛膜特异性转录因子GCM2抗体2-C-Methyl-D-erythro-1,4-lactone中文名:别名:分子式:C5H8O4
广泛控制氨基酸合成1样蛋白1抗体Tetrahydrolachphyllum lactone中文名:别名:分子式:C10H14O2
β1-6 N-乙酰氨基葡萄糖转移酶2抗体(Z)-Lachphyllum lactone中文名:别名:分子式:C10H10O2