注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
N-Acetyl-L-phenylalanine葡萄糖氧化酶 100U/mg三乙基膦 97%

 Melatonin异硫酸胍 用于分子生物学, ≥99%三环戊基膦 95%

L-Leucil异硫酸胍 ≥99%氧化苦参碱 分析标准品

L-PhenylalanilD-葡萄糖-6-磷酸二钠盐 98%金雀花碱 分析标准品

D-Phenylalanil糖原 ≥90% 秦皮甲素 99%

D-Phenylglycil甘油 for molecular biology, ≥99%哈尔碱 98%

D-Prolil甘油 无菌,for molecular biology, ≥99%哈尔碱 分析标准品，98%

L-Methionionl羟乙基纤维素 80～125mpa.s，25℃ 苦参碱 分析标准品，≥98%

L-Threonil顺式-4-羟基-L-脯氨酸 98%苦参碱 98%

L-Valil羟赖氨酸 97% 厚朴酚  分析标准品，>98%

L-Isoleucil潮霉素B溶液 50mg/ml溶液厚朴酚  ≥98% (HPLC)

D-Tryptophal潮霉素B 超纯级蛇床子素 分析标准品，≥99.5%

(R)-(−)-Leucil十二烷基硫酸锂 99%蛇床子素 99%

Boc-L-asparagineDL-乳酸锂 97%邻氨基酚磺酸 98%

Boc-D-asparagineN-月桂酰肌氨酸钠 98%茜素 97%

Boc-Asp-OH亮抑酶酞 ≥90% (HPLC2,6-二氯苯 98%

乙二苯(standard for GC,≥99.5%(GC))cPLA2 Antibodyp73 alpha  p53相关蛋白P73α抗体

菊酯(标准品)NeuroD Antibodyp70 S6 Kinase Beta 2/P70 Beta 2  核糖体S6蛋白激酶β2抗体

基阿维菌素苯甲酸盐(标准品)Phospho-Bcl-2 (Ser70) (5H2) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 488 Conjugate)p70 S6 kinase beta  核糖体蛋白S6激酶1抗体

乙蒜素(标准品)Neurofilament-L (DA2) Mouse mAbp70 S6 kinase alpha  磷酸化核糖体p70 S6蛋白激酶抗体

乙硫(标准品)Neurofilament-L (DA2) Mouse mAbP63 protein/P51A  P63 肿瘤抑制基因抗体

甲酸乙酯(标准品)Neurofilament-H (RMdO 20) Mouse mAbp58ipk  p58ipk抗体

甲酸乙酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Neurofilament-H (RMdO 20) Mouse mAbp55/DCAF1  染色质组装因子1P55抗体

乙二乙(标准品)Neurofilament-L (C28E10) Rabbit mAbp53R2/RRM2B  核苷酸还原酶M2B抗体

芥酸(标准品)Neurofilament-L (C28E10) Rabbit mAbp53BP1/53BP1  p53结合蛋白1抗体

磷标准溶液(1mg/ml,溶剂：甲)Neurofilament-M (RMO 14.9) Mouse mAbp53AIP1  p53调节凋亡诱导蛋白1抗体
刚地弓形虫PCR检测试剂盒说明书DSCC1蛋白抗体Urs-12-ene-3β,16β,22α-triol中文名：别名：分子式：C30H50O3

动力蛋白激活蛋白6抗体Zeorin中文名：别名：6,22-Hopanediol分子式：C30H52O2

动力蛋白激活蛋白亚基3抗体Laxiracemosin H中文名：别名：分子式：C26H353

大脑发育同源蛋白2抗体3-Oxo-21α-methoxy-24,25,26,27-tetrartirucall-7-ene-23(21)-lactone中文名：别名：分子式：C27H40O4

脑发育同源蛋白1抗体Aphagranin A中文名：别名：分子式：C33H54O6
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。