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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 鸡类圆线虫PCR检测试剂盒规格 |
英文名称 | Strongyloides aviumPCR |
货号 | LZP7348 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
1-Indanamine碳酸二乙酯 高纯级衣康酸 AR,99.8%
1-Indane碳酸二酯 99.9%曲酸 99%
1-Octane,1-[4-[2-(acetyloxy)ethyl]phenyl]碳酸二甲酯(DMC) 98%乙基环己烷 99%
1-Oxo-4-hydroxy-2-en-4-ethylcyclohexa-5,8-olide碳酸二甲酯(DMC) 99%甲基环己烷 99%
1-Phenyloctane碳酸乙烯酯 98.0%氟化,二 CP
Sorbic acid, 1-p-tolylhydrazide碳酸乙烯酯 99%氟化,无 AR,粉末
2-[2-(2,2,2-Trifluoroethoxy)phexy]ethyl bromide碳酸甲乙酯 98%氟化,无 GR,粉末
2-[2-(2,2,2-Trifluoroethoxy)phexy]ethyl methanesulfonate碳酸烯酯 99%钯粉 99.9% metals basis,粒径0.5μm
2-(7-Methoxy-1-naphthyl)ethylamine hydrochloride戊二酸二乙酯 99%硝酸银 99.99% metals basis
2-Acetamidoethyl phosphate己二酸二乙酯 AR,99.5%溴代异烷 CP
(2-Amiethyl)phosphinic acid4-基苯酸 97%2-溴代苯酮 96%
(2-Amiethyl)phosphonic acid1,3-酮二羧酸 97%三溴化磷 CP,98.0%
2-Bromo-1-(3-thienyl)-1-ethane3-氨基烷磺酸 97%酸 AR,≥99.5%
2-C-Methyl-D-erythro-1,4-lactone焦碳酸二乙酯 98%酸 CP,≥99.0%
2-(Dimethylami)ethanesulfonic acid邻乙氧基苯甲酸 98%酸 GR,≥99.8%
2-Dimethylamiethylphosphonic acid2-吡啶乙酸盐酸盐 99%酸 PT
二苯胺磺酸钡(98%)CD4 (D7D2Z) Rabbit mAbphospho-C CBL(Tyr674) 磷酸化原癌基因CBL2抗体
灿烂黄SUFU (C81H7) Rabbit mAbPhospho-BTK/BPK(Tyr223) 磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗体
刚果红(AR)Acetyl-Stat3 (Lys685) AntibodyPhospho-Btk(Ser180) 磷酸化蛋白酪氨酸激酶ATK抗体
甲酚红Acetyl-Stat3 (Lys685) AntibodyPhospho-BRCA1(Ser988) 磷酸化癌易感基因1抗体
邻甲酚酞p53 (1C12) Mouse mAbPhospho-BRCA1(Ser1524) 磷酸化癌易感基因1抗体
钙羧酸指示剂(AR)p53 (1C12) Mouse mAbPhospho-BRCA1(Ser1423) 磷酸化癌易感基因1抗体
钙羧酸指示剂(Indicator)Acetyl-p53 (Lys382) AntibodyPhospho-BRCA1(Ser1189) 磷酸化癌易感基因1抗体
氯酚红Acetyl-p53 (Lys382) Antibodyphospho-B-Raf (Thr597) 磷酸化B-Raf抗体
钙镁试剂Phospho-p53 (Ser33) Antibodyphospho-B-Raf (Thr401) 磷酸化B-Raf抗体
邻甲酚酞络合剂p53 (7F5) Rabbit mAbphospho-B-Raf (Ser602) 磷酸化B-Raf抗体
鸡类圆线虫PCR检测试剂盒规格4-Fluoro-3-nitrobenzotrifluoride,99%通用试剂 5G
1-Iodo-4-nitrobenzene,98%通用试剂 5G
Hexylbenzene,≥99.8%通用试剂 1ML
4-Bromo-3-nitrotoluene,90%通用试剂 5G
1-Bromo-4-chloro-2-nitrobenzene,97%通用试剂 5G
Styrene oxide,97%通用试剂 25G
m-Terphenyl,99%通用试剂 25G
o-Terphenyl,99%通用试剂 25G
Cumene hydroperoxide,80%通用试剂 100ML
Pentacene,99%通用试剂 100MG
4-Methyl-3-nitrobenzonitrile,97%通用试剂 5G
1,3-Bis(trifluoromethyl)-5-bromobenzen...通用试剂 10G
[Bis(trifluoroacetoxy)iodo]benzene,97%通用试剂 5G
Hexamethylbenzene,99%通用试剂 1G
1,3,5-Tri-tert-butylbenzene,97%通用试剂 5G