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详情介绍
产品属性:
产品名称 | TF组织因子ELISA试剂盒 |
英文名称 | IF ELISA Kit |
产品规格 | 48T/96T |
产品货号 | LZ-E028535 |
需要而未提供的试剂和器材:
1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等。
标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
备试剂与收集血样:
1. 收集标本:血清、血浆(EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测, 2-8 ℃ 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反复冻融。
2. 标准品液配制:使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管,管加标本稀释液 900ul ,第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反复作对倍稀释,从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。
3. 10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例: 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。
4. 洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)
检测程序:
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
3. 每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
样本实验前准备:
ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
(1)血清
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
(4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
(5)培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(6)组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
多巴D2受体(D2R)试剂盒番泻苷元A茉莉酯 95%锌 Anhydrous
多巴D2受体(D2R)试剂盒番泻苷元B7- 98%3.5水锌 粒度 1~2μm
内肽-2(EM-2)试剂盒反式茴香脑己酯 Standard for GC,>99.5%(GC)3.5水锌 粒度 2~5μm
内肽-2(EM-2)试剂盒芳樟己酯 分析标准品,≥99.7% (GC)3.5水锌 粒度 6~10μm,防腐级
α-内肽(α-EP)试剂盒防己诺林(s)-(+)-α-氧-α-(三氟)苯乙酰 99%氟苯 99%
α-内肽(α-EP)试剂盒飞蓬苷(+)-薄荷酯 97%氟化苯标准溶液 水质分析标准溶液,1mg/ml 溶液
抑制素(INH)试剂盒飞蓬酯乙硫代硫镁 超纯级氟苯 Standard for GC ,≥99.6% (GC)
抑制素(INH)试剂盒非洲防己三氟酯 97%氟苯 CP
神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)试剂盒 粉防己N--3-吲哚乙 97%氟苯 分析标准品
神经元凋亡抑制蛋白(NAIP)试剂盒 风信子素4-庚烷 99%己丁酯 standard for GC, ≥99.5% (GC)
食欲素/阿立新B(OX-B)试剂盒蜂斗菜内酯A环己 98%己丁酯 ≥98%
食欲素/阿立新B(OX-B)试剂盒佛手柑内酯4--3- 98%丁位十二内酯 98%
促睡眠肽(DSIP)试剂盒佛手柑素(-)2,2′-亚双(3α,8α-二氢-8H-茚并[1,2--d]噁唑 98%丁乙酯 99%
促睡眠肽(DSIP)试剂盒佛司可林2,2′-亚双[(4,s)-4-苯-2-噁唑啉] 97%异戊 98%
6-羟多巴(6-OHDA)试剂盒 2,2′-亚双[(4,s)-4-叔丁-2-噁唑啉] 99%异戊 Standard for GC,>99%(GC)
6-羟多巴(6-OHDA)试剂盒 扶桑甾氮芥盐盐 98%异戊 ≥97%,Kosher
TF组织因子ELISA试剂盒MTS细胞增殖与毒性检测试剂盒是应用新型的水溶性甲臢化合物[3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-5-(3-羧甲酯基)-2-(4-磺苯基)-2H-四唑(金翁),内盐;MTS]快速高灵敏度检测细胞增殖和细胞毒性的比色检测产品。
MTS被细胞生物还原成一种可溶于组织培养基的甲臢化合物,新陈代谢活跃的活细胞内的脱氢酶类将MTS转化成液态可溶的甲臢化合物,这种甲臢化合物在490nm的吸收值可以直接在96孔板上测量,而不需要另外作处理。由490nm测量的吸收值所表示的甲臢产物的数量与培养物中活性细胞的数量成正比。细胞增殖越多越快,则颜色越深;细胞毒性越大,则颜色越浅。对于同样的细胞,颜色的深浅和细胞数量呈线性关系。
MTS溶液可以直接加入到细胞样品中,不需要预配各种成分,MTS溶液很稳定,对细胞没有毒性,可以长时间孵育细胞。MTS法测定细胞增殖或毒性试验中活细胞数目的灵敏度高,无放射性,检测细胞增殖实验的灵敏度比其它方法如MTT,XTT和WST-1高。
储存条件:2-8℃避光保存。长期不用的分装后于-20℃避光保存,避免反复冻融。
有效期:一年。
操作步骤:
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。