当前位置:首页 > 产品展示 > ELISA试剂盒 > 免费代测ELISA试剂盒 > 48T/96TVEGF-D血管内皮细胞生长因子DELISA试剂盒
详情介绍
产品属性:
产品名称 | VEGF-D血管内皮细胞生长因子DELISA试剂盒 |
英文名称 | VEGF-D ELISA Kit |
产品规格 | 48T/96T |
产品货号 | LZ-E028864 |
需要而未提供的试剂和器材:
1. 产品仅用于科研标准规格酶标仪
2. 高速离心机
3. 电热恒温培养箱
4. 干净的试管和Eppendof管
5. 系列可调节移液器及吸头,一次检测样品较多时,用多通道移液器
6. 蒸馏水,容量瓶等。
标本要求:
1.标本采集后尽早进行提取,提取按相关文献进行,提取后应尽快进行实验。若不能马上进行试验,可将标本放于-20℃保存,但应避免反复冻融。
2.不能检测含NaN3的样品,因NaN3抑制辣根过氧化物酶的(HRP)活性。
备试剂与收集血样:
1. 收集标本:血清、血浆(EDTA 、柠檬酸盐、肝素抗凝)、细胞培养上清液、组织匀浆等尽早检测, 2-8 ℃ 保存48 小时;更长时间须冷冻( -20 ℃或 -70 ℃ )保存,避免反复冻融。
2. 标准品液配制:使用前加入0.5ml 蒸馏水 混匀,配成 120 0ng/ml 的溶液 。 设标准 管 8 管,管加标本稀释液 900ul ,第二至第八管加入标本稀释液 500ul 。在管中加入 120 0ng/ml 的标准品溶液 100ul 混匀后用加样器吸出 500ul ,移至第二管 。如此反复作对倍稀释,从第七 管 中吸出 500ul 弃去。第八 管 为空白对照。
3. 10× 标本稀释液用蒸馏水作 1: 1 0 倍稀释( 示例: 1ml浓稀释液 +9ml 蒸馏水)。
4. 洗涤液:用重蒸水 1:20 稀释(示例:1ml 浓缩洗涤液加入 19ml 的重蒸水)
检测程序:
1. 加样:每孔各加入标准品或待测样品 100ul ,将反应板充分混匀后置 37 ℃ 120 分钟。
2. 洗板:用洗涤液将反应板充分洗涤 4-6 次,向滤纸上印干。
3. 每孔中加入抗体工作液10 0ul 。将反应板充分混匀后置 37 ℃ 6 0 分钟。
4. 洗板:同前。
5. 每孔加酶标抗体工作液100ul 。将反应板置 37 ℃ 3 0 分钟。
样本实验前准备:
ELISA试剂盒液体样本:包括血清、血浆、尿液、胸腹水、脑脊液、细胞培养上清等。
(1)血清
室温血液自然凝固10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(2)血浆:
应根据标本的要求选择EDTA、柠檬酸钠或肝素作为抗凝剂,混合10-20分钟后,离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(3)尿液:
用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。胸腹水、脑脊液参照此实行。
(4)细胞培养上清:
检测分泌性的成份时,用无菌管收集。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。
(5)培养细胞
检测细胞内的成份时,用PBS(PH7.2-7.4)稀释细胞悬液,细胞浓度达到100万/ml左右。通过反复冻融或加入组织蛋白萃取试剂,以使细胞破坏并放出细胞内成份。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。保存过程中如有沉淀形成,应再次离心。
(6)组织标本
切割标本后,称取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷冻保存备用。标本融化后仍然保持2-8℃的温度。加入一定量的PBS(PH7.4),或组织蛋白萃取试剂, 用手工或匀浆器将标本匀浆化。离心20分钟左右(2000-3000转/分)。仔细收集上清。分装后一份待检测,其余冷冻备用。
大鼠可溶性瘦素受体(sLR)试剂盒盐水(1×NS,无菌)Boc-L-谷氨酰 98%2--4-硝吡啶 98.0%
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)试剂盒盐水(10×NS,无菌)N-叔丁氧羰-D-3-苯氨 98%L-苹果二酯 98%
大鼠窖蛋白Caveolin1(Cav-1)试剂盒无菌双蒸水Boc-N--L-缬氨 98%2,4-二 97%
大鼠艾杜糖硫酯(IDS)试剂盒 无菌双蒸水BOC-D-氨 98%D-苹果二酯 98%
大鼠艾杜糖硫酯(IDS)试剂盒 碳钠-碳氢钠缓冲液(0.1mol/L,pH9.16-10.83)Nα-叔丁氧羰-N'--L-色氨 97%4-氟吡啶盐盐 98%
大鼠血管内皮生长因子(VEGF)试剂盒 碳氢钠溶液(1mol/L,pH8.3-9.0)Boc-D-酪氨 98%5-羟-1-茚 98%
大鼠血管内皮生长因子(VEGF)试剂盒 亚硝钠水溶液(1%)N,N'-二叔丁氧羰-L-赖氨二环己盐 98%4-羟吲哚 98%
大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒 乙溶液(75%)BOC-D-苯甘氨 98%盐 98%
大鼠肿瘤坏死因子α(TNF-α)试剂盒 乙铵溶液(1mol/L,无菌)BOC-L-异亮氨 99%3--4-硝吡啶-N-氧化物 98%
大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)试剂盒 乙缓冲液(0.1mol/L,pH3.6-5.6)N-叔丁氧羰-S-三苯-L-半胱氨 99% 2--4-硝氧化吡啶 98%
大鼠转化生长因子β1(TGF-β1)试剂盒 乙溶液(3mol/L,pH5.5)叔丁氧羰-L-赖氨 98%间三氟酯 99%
大鼠干因子/肥大生长因子(SCF/MGF)试剂盒乙溶液(5mol/L,pH4.8)N-Boc-4-氧-L-脯氨酯 97%4-哌啶盐盐,水合 98%
大鼠干因子/肥大生长因子(SCF/MGF)试剂盒乙钠溶液(3mol/L,pH5.2)N-叔丁氧羰-2-氨 98%4-氨三氟苯 98%
大鼠烟酰腺嘌呤二核磷(NADPH)试剂盒乙钠溶液(3mol/L,pH5.2)(S)-N-BOC-4-溴苯氨 98%邻三氟 98%
大鼠烟酰腺嘌呤二核磷(NADPH)试剂盒乙钠溶液(3mol/L,pH5.2,无菌)叔丁二硅烷 97%3-(三氟)苯酰 98%
大鼠血小板衍生生长因子AB(PDGF-AB)试剂盒乙钠溶液(3mol/L,pH5.2,无菌)D- 98%4-(三氟)苯 96%
VEGF-D血管内皮细胞生长因子DELISA试剂盒用途:
又称促蓝液,用于染色后蓝化,尤其推荐用于Gill'sⅢ蓝化蓝化。
注意事项:
主要由硫镁、碳氢钠等组成。
储存条件:室温,12个月
操作步骤:
1.标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样:分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂,其余各步操作相同)、标准孔、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。
3.温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用。
5.洗涤:小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。
6.加酶:每孔加入酶标试剂50μl,空白孔除外。
7.温育:操作同3。
8.洗涤:操作同5。
9.显色:每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色15分钟。
10. 终止:每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。
11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。