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免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其*覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
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英文名称 Anti-CACNA1F
中文名称 钙离子通道a1F亚型抗体规格
别 名 CACNA 1F; CACNAF; CACNAF1; Calcium channel voltage dependent alpha 1F subunit; Calcium channel voltage dependent L type alpha 1F subunit; Cav1.4; Cav1.4alpha1; COD 3; COD3; CORDX 3; CORDX; CORDX3; CSNB2A; CSNBX 2; CSNBX2; JM 8; JM8; JMC 8; JMC8; Voltage ated calcium channel subunit alpha Cav1.4; Voltage ependent L ype calcium channel subunit alpha F; CAC1F_HUMAN.
浓 度 1mg/1ml
规 格 0.1ml/100μg 0.2ml/200μg
抗体来源 Rabbit
克隆类型 polyclonal
交叉反应 Human, Mouse, Rat, Pig, Cow, Sheep
产品类型 一抗
研究领域 神经生物学 信号转导 通道蛋白
蛋白分子量 predicted molecular weight: 221kDa
性 状 Lyophilized or Liquid
免 疫 原 KLH conjugated synthetic peptide derived from human CACNA1F
亚 型 IgG
免疫荧光技术的实验步骤:
一、准备好试剂与仪器:
磷酸盐缓冲盐水、荧光标记的抗体溶液、缓冲甘油、搪瓷桶三只、有盖搪瓷盒一只、荧光显微镜、玻片架、滤纸、37℃温箱等。
二、实验步骤
1.滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,十分钟后弃去,使标本保持一定湿度。
2.滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其*覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间以三十分钟为参考。
3.取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸三到五分钟,并不停地摇晃振荡。
4.取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
5.立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度。
抗体的制备过程:
1. 免疫原的制备
普通的大分子蛋白,通过分子克隆构建载体并在大肠杆菌中进行诱导表达获得重组蛋白,纯化鉴定后可直接作为免疫原。
小分子蛋白或化合物等分子量小,需要偶联载体对该分子进行改造才能使其成为具有免疫原性的抗原,常见偶联载体如BSA、OVA、HAS等。
2. 免疫动物
常用于制备抗血清的动物有豚鼠、家兔、鸡、大小鼠等,大量生产时需要用到狗、绵羊、山羊等。
3. 免疫血清的收集
一般家兔、绵羊、山羊可采用静动脉采血,家兔、豚鼠、大鼠、鸡可采用心脏采血,家兔、山羊、绵羊可采用静脉采血。
4. 免疫血清的纯化与鉴定得到的抗血清需要进一步的纯化,利用偶联了抗原的亲和柱进行层析,具有高效,特异性强,纯度高的特定。接着要鉴定纯化蛋白的含量、相对分子的质量、纯度以及特异性。
5. 免疫血清的保存建议将抗体分装后进行保存。抗体一般比较稳定,在-80℃ ~-20 ℃可以保存约5年而不会影响效价,而真空干燥保存时间可以更久。保存前需经除菌并添加防腐剂。
实验步骤:
① 滴加0.01mol/L,pH7.4的PBS于待检标本片上,10min后弃去,使标本保持一定湿度。
② 滴加适当稀释的荧光标记的抗体溶液,使其*覆盖标本,置于有盖搪瓷盒内,保温一定时间(参考:30min)。
③ 取出玻片,置玻片架上,先用0.01mol/L,pH7.4的PBS冲洗后,再按顺序过0.01mol/L,pH7.4的PBS三缸浸泡,每缸3-5 min,不时振荡。
④ 取出玻片,用滤纸吸去多余水分,但不使标本干燥,加一滴缓冲甘油,以盖玻片覆盖。
⑤ 立即用荧光显微镜观察。观察标本的特异性荧光强度,一般可用“+"表示:
(-)无荧光;(±)极弱的可疑荧光;(+)荧光较弱,但清楚可见;(++)荧光明亮;(+++ --++++)荧光闪亮。待检标本特异性荧光染色强度达“++"以上,而各种对照显示为(±)或(-),即可判定为阳性。
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猪26S蛋白酶体(26S-PSM)酶联免疫吸附测定试剂盒 Anti-RAMP-1/FITC 荧光素标记受体活性调制蛋白1抗体IgG
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