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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 鹅源性成分(Goose)核酸试剂盒厂家 |
规格 | 48T |
货号 | LZP8146 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
Galerone (TOK001)(R)-哌-2-羧酸
山柰酚-槐二糖-7-鼠李糖苷(1S,2R)-(-)-1-氨基-2-茚
己酮可可(标准品)5,5-二甲基-1,环己二酮
波必利(标准品)酮肟
醉鱼草皂苷IVb(标准品)羟基脲
二酸倍他米松(标准品)酸
厄多司坦(标准品)无水醋酸钠
吡美莫司;匹美莫司二二茂钛
托拉塞米(标准品)酮酸
萘哌地尔四
萘哌地尔(标准品)N,N-二甲基酰
厄贝沙坦(标准品)(2-吡啶基)-甲
马来酸替加色罗(标准品) B
三双脒(标准品)磺酸钠
焦地黄甙B1(标准品)1-氨基-1-环基盐酸盐
N-6022N-溴代丁二酰亚
巴柳氮钠(标准品)N-代丁二酰亚
3,4,5-*酸(标准品)抗氧剂264
细胞周期后期促进蛋白亚基11E2F1/FITC 荧光素标记转录因子E2F-1IgG100 ul
腺瘤性结肠息肉病蛋白2E2F2/FITC 荧光素标记转录因子E2F-2IgG100 ul
酸化细胞分裂周期蛋白16E2F3/FITC 荧光素标记转录因子E2F-3IgG100 ul
DNA修复酶相互作用蛋白E2F4/FITC 荧光素标记转录因子E2F-4IgG100 ul
脂肪细胞膜相关蛋白E2F5/FITC 荧光素标记转录因子E2F-5IgG100 ul
载脂蛋白A1结合蛋白E2F6/FITC 荧光素标记抗转录因子E2F-6IgG100 ul
载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物1E2 tag/FITC 荧光素标记E2 tag标签IgG100µg
载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物2E2 tag/HRP 辣根过氧化物酶标记E2 tag标签IgG100 ul
载脂蛋白B-mRNA编辑酶复合物3BE7 proin/FITC 荧光素标记头瘤病毒16型E7IgG20 ul
鹅源性成分(Goose)核酸试剂盒厂家多巴胺脱羧酶抗体Folic acid中文名:叶酸别名:分子式:C19H19N7O6
结蛋白抗体Amprolium hydrochloride中文名:盐酸氨丙林别名:分子式:C14H20Cl2N4
DISC1 C端抗体4-Amiphenylarsonic acid中文名:4-氨基苯胂酸别名:分子式:C6H7AsO4
DISC1 N端抗体Furosemide中文名:别名:分子式:C12H11ClN2O5S
抑癌基因抗体Ethyl 3-(4-(methylami)-3-nitro-N-(pyridin-2-yl)benzamido)propaate中文名:别名:分子式:C18H20N4O5