注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
橙黄决明素(标准品)Synapsin-1 (D12G5) XP® Rabbit mAb5-溴戊酸酯

橙皮苷(标准品）Synapsin-1 (D12G5) XP® Rabbit mAb苄氧基酸

橙皮苷FoxP3 (D25D4) Rabbit mAb9-蒽

橙皮素(标准品)Atg4B Antibody三基膦化铑

虫草素(标准品)Phospho-cPLA2 (Ser505) (D4I2A) Rabbit mAb-甲酸甲酯

川陈皮素;蜜橘黄素GAD1 Antibody盐酸海拉明

川陈皮素(标准品)mNeonGreen Tag Antibody氟-2-甲

川楝素(标准品）AMPA Receptor 2 (GluA2) (D39F2) Rabbit mAb2-吲哚甲酸

川芎(标准品)AMPA Receptor 2 (GluA2) (D39F2) Rabbit mAb2-氨基-5-并噻唑

川芎GAP43 Antibody丁二酸单酯酰

川续断皂苷VI；木通皂苷D（标准品）SNAP25 (D7B4) Rabbit mAb阿糖胞苷

川续断皂苷（标准品）SNAP25 (D9A12) Rabbit mAbN-(氨基磺酰基)氨酸叔丁酯

次(标准品)Semaphorin-4D/CD100 (E5C3B) XP® Rabbit mAb二氧化硅

次野鸢尾黄素（标准品）Semaphorin-4D/CD100 (E5C3B) XP® Rabbit mAbL-2 DIAMINOBUTYRIC ACID MONOHYDRO-CHLO

刺芒柄花苷（标准品）PTP1B Antibody甲基吡啶-酸

刺五加苷E（标准品）Human RANKL/TRANCE/TNFSF11 (hRANKL)四正辛基溴化铵

刺五加皂苷B（标准品）Human RANKL/TRANCE/TNFSF11 (hRANKL)噻菌灵

醋酸辛酯（标准品）RBPSUH (D10A4) XP® Rabbit mAb5--2-酸

酸化活化复制因子2CD19/FITC  荧光素标记CD19IgG100 ul

酸化活化复制因子2Phospho-CD19 (Tyr531) /FITC  荧光素标记兔抗、大、CD19IgG100 ul

酸化活化复制因子2CD19/PE  荧光素PE标记CD19IgG20 ul

酸化活化复制因子2CD20/FITC  荧光素标记CD20IgG400 ul

酸化活化复制因子2CD20/Biotin  生物素化CD20IgG400 ul

活化转录因子5CD20/MS4A1/PE  荧光素PE标记CD20IgG100 ul

活化转录因子6βCD25/IL-2RA /PE-Cy5  荧光素PE-Cy5标记兔抗、大、白介素2受体a链IgG400 ul

AICAR甲酰基转移酶CD22/FITC  荧光素标记抗白细胞分化抗原CD22IgG100 ul

酸化毛细血管扩张性共济失调症突变蛋白CD23/Fc EpsilonR II /FITC  荧光素标记CD23IgG100 ul
副溶血性弧菌(VP)核酸试剂盒厂家8号染色体开放阅读框77抗体4'-Hydroxywogonin中文名：4'-羟基汉黄芩素别名：4',5,7-Trihydroxy-8-methoxyflavone分子式：C16H12O6

补体C9b抗体Acacetin中文名：金合欢素别名：5,7-Dihydroxy-4'-methoxyflavone; 刺槐素分子式：C16H12O5

9号染色体开放阅读框103抗体Isosinensetin中文名：异橙黄酮别名：分子式：C20H20O7

9号染色体开放阅读框131抗体Gallocatechin中文名：没食子儿茶素别名：分子式：C15H14O7

9号染色体开放阅读框135抗体Catechin pentaacetate中文名：儿茶素全乙酸酯别名：分子式：C25H24O11
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。