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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 鼠疫杆菌(YP)核酸试剂盒价格 |
规格 | 48T |
货号 | LZP8073 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
白当归素(标准品)RPA32/RPA2 Antibody2-庚酮
白果内酯(标准品)STAMBP Antibody苄基哌盐酸盐
白花前胡(标准品)STAMBP Antibody四亚甲基二
环杷明;环巴;去氧芥芬(标准品)Ezh2 (D2C9) XP® Rabbit mAb丁二
白桦脂Ezh2 (D2C9) XP® Rabbit mAb丁炔二
白桦脂(标准品)IRF-5 (E1N9G) Rabbit mAb (PE Conjuga)N-基二
白桦脂(标准品)COX IV (3E11) Rabbit mAb (HRP Conjuga)环己烷
白桦脂酸(标准品)HIF-1α (D1S7W) XP® Rabbit mAb (Alexa Fluor® 647 Conjuga)6-氟色满-2-羧酸
白桦脂酸cPLA2 (D49A7) Rabbit mAb5-氨基间二甲酸
白蜡树素(标准品)Renin Antibody溴吲哚酮
白术内酯Ⅰ(标准品)ASXL1 (D1B6V) Rabbit mAb3,二羟基甲酸
白术内酯III(标准品)Phospho-TCTP (Ser46) Antibody硝基邻甲酚 OR 2-甲基-酚
白头翁皂苷B4(标准品)Phospho-Connexin 43 (Ser368) (D6W8P) Rabbit mAb2-甲基-溴甲酸甲酯
百秋李Phospho-AMPKα (Thr172) (40H9) Rabbit mAb (Biotinylad)溴-2-甲酸甲酯
百蕊草素I;山柰酚-葡萄糖鼠李糖苷;阿福豆苷(标准品)Rat (LTF-2) mAb IgG2b Isotype Control (violetFluor™ 450 Conjuga)2-氨基-酚
宝藿苷I,羊藿次苷II(标准品)Anti-mouse IgG (H+L) (DyLight™ 800 4X PEG Conjuga)间二甲酰
贝母素甲(标准品)Anti-mouse IgG (H+L) (DyLight™ 800 4X PEG Conjuga)1,二
贝母素(标准品)NF-κB2 p100/p52 (D9S3M) Rabbit mAb(Boc-氨基)吡咯烷
APP/ABPP淀粉样肽前体蛋白CCR6/CD196/FITC 荧光素标记趋化因子受体6IgG100 ul
甲胎蛋白(包被)CCR-7/FITC 荧光素标记CC趋化因子受体7IgG100 ul
甲胎蛋白(检测)CCR-8 /FITC 荧光素标记细胞表面趋化因子受体8IgG20 ul
ADP核糖基化因子结合蛋白1CCR-9/FITC 荧光素标记细胞表面趋化因子受体9IgG100 ul
芳香烃受体CCR-10/FITC 荧光素标记细胞表面趋化因子受体10IgG100 ul
吸引素CCRK/FITC 荧光素标记细胞周期相关激酶IgG100 ul
腺苷三酸结合盒转运体A1CD2/FITC 荧光素标记CD2IgG20 ul
蛋白激酶B2CD2AP/FITC 荧光素标记白细胞分化抗原CD2APIgG100 ul
血管生成素2SLAMF9/CD2F-10/FITC 荧光素标记CD2F-10IgG100 ul
鼠疫杆菌(YP)核酸试剂盒价格卤酸脱卤酶样解酶域内含蛋白1A抗体3α-Angeloyloxypterokaurene L3中文名:别名:分子式:C25H36O5
His 结构域内含酪氨酸磷酸酶蛋白抗体Dodolide中文名:别名:分子式:C20H24O3
多聚腺苷酸因子Clp1蛋白抗体9α,13α-Epidioxyabiet-8(14)-en-18-oic acid中文名:别名:分子式:C20H30O4
肌球蛋白重链抗体Bisandrographolide C中文名:别名:分子式:C40H56O8
HECT E3泛素链接酶抗体Kaureic acid中文名:贝壳杉烯酸别名:分子式:C20H30O2