注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
O-β-D-葡萄糖( 1→3)- a -L-鼠李糖(1→2)- a-L-阿拉伯糖 齐墩果酸– 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷Phospho-KSR1 (Ser392) Antibody1-(2-基)哌啶

O-b-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 2羟基羽扇豆20(29)--28–酸- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷PP2A B Subunit AntibodyN-(2-氨基基)吗啉

O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 常春藤配基- 28-O-鼠李糖(1→4)葡萄糖(1→6)葡萄糖苷PP2A B Subunit Antibody2-溴联

D-果糖-6-酸二钠盐RelB Antibody基酰亚盐酸盐

5-溴吡啶-甲Phospho-Tau (Thr205) (E7D3E) Rabbit mAb溴-alpha-

6-溴吡啶-2-甲SLP-76 Antibody5-羟基异喹啉

白头翁皂苷BSLP-76 Antibody1,二氧杂环己烷-2-酮

O-β-D-葡萄糖( 1→4)-[ a -L-鼠李糖(1→2)]- a-L-阿拉伯糖 2羟基羽扇豆20(29)--28–酸;白头翁皂苷DAID (EK2 5G9) Rat mAb2,二甲氧基

罗汉果皂苷IvaDigoxigenin (D8Q9J) Rabbit mAb (HRP Conjuga)L-亮氨酸叔丁酯盐酸盐

异罗汉果皂苷 VVimentin (V9) Mouse mAbN-羟基酞酰亚

盐酸青藤Hamartin/TSC1 (1B2) Mouse mAb1H-吡唑-1-甲脒盐酸盐

盐酸青藤（标准品）IRF-4 Antibody2,2-二羟甲基酸

脱氧核糖核酸钠(小牛胸腺)TBR1 (D6C6X) Rabbit mAb2-并咪唑

核糖核酸(酵母)β-Actin Antibody2-并咪唑

溴-2-甲酰基吡啶β-Actin Antibody盐酸胍

尿苷-5'-二酸葡萄糖钠盐(UDPG)Pan-Actin Antibody甲硫钠

5-鸟苷一酸二钠盐(GMP)Endonuclease G Antibody基吲唑

腺苷-5单酸(进口原装) β-Actin (13E5) Rabbit mAb2,4,6-三肼

唾液酸糖蛋白受体1BMP4/FITC  荧光素标记骨形态发生蛋白4IgG1 Kit

芳香基硫酸酯酶FBMP6/FITC  荧光素标记骨形态发生蛋白6IgG100 ul

A激酶锚定蛋白5BMP-7/FITC  荧光素标记骨形态发生蛋白-7IgG1 Kit

小脑脊髓共济失调蛋白3BMP8/FITC  荧光素标记骨形态发生蛋白8IgG100 ul

AS1蛋白BMPR-1A/FITC  荧光素标记骨成型蛋白受体1AIgG20 ul

酸化自噬相关蛋白4BBNP/FITC  荧光素标记脑钠素IgG1 Kit

微丝相关蛋白1BNP/FITC  荧光素标记脑钠素IgG100 ul

腺苷A1A受体BRN3A /FITC  荧光素标记转录因子Brn3蛋白IgG100 ul

芳基硫酸酯酶BBOb-1/FITC  荧光素标记B细胞特异性转录因子IgG100 ul
嗜水气单胞菌（AH）核酸试剂盒规格4号染色体开放阅读框3抗体Ethyl 3,4,5-trimethoxybenzoate中文名：别名：分子式：C12H16O5

组织蛋白酶S抗体Phloracetophene中文名：别名：2',4',6'-Trihydroxyacetophene分子式：C8H8O4

前列腺雄激素抑制信号蛋白1抗体Ethyl 2,4,6-trihydroxybenzoate中文名：2,4,6-三羟基苯甲酸乙酯别名：分子式：C9H10O5

细胞死亡诱导蛋白抗体1,5-Bis(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)penta-1,4-diene中文名：别名：分子式：C19H20O4

细胞质脆性X智力低下蛋白结合蛋白2抗体Mulberrofuran H中文名：别名：分子式：C27H22O6
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。