注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
磺间二甲氧嘧啶钠(标准品)Phospho-cdc25C (Ser216) (63F9) Rabbit mAb2-氟-6-溴

毛地黄毒苷配基Phospho-cdc25C (Ser216) (63F9) Rabbit mAb2-氟-6-甲

柯诺辛PI4 Kinase Antibody(S)-1-BOC-2-哌甲酸甲酯

乌拉地尔(标准品)Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb溴-氟甲

夫西地酸钠Nanog (D73G4) XP® Rabbit mAb2-甲基-5-溴甲酸甲酯

夫西地酸钠(标准品)Stat3 (79D7) Rabbit mAb6-溴吲唑

3,5-二-L-酪氨酸Stat3 (79D7) Rabbit mAb对十二烷基磺酰叠氮

氟西林钠(标准品)Ezh2 Antibody四溴双酚 A

巴利森苷A；派立辛LAMP2 (D5C2P) Rabbit mAb1-羟基并三唑一水物

山楂酸,马斯里酸Hamartin/TSC1 Antibody二-联共晶

2-基并咪唑-5-磺酸,紫外线吸收剂 UV-TPhospho-Stat3 (Ser727) (D8C2Z) Rabbit mAb (Biotinylad)异基酸

毛萼素Mouse (MOPC-21) mAb IgG1 Isotype Control (APC Conjuga)双酚 A

知母皂苷元53BP1 (P550) Antibody二二硅烷

4'-去甲鬼臼毒素Tri-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D5A7) XP® Rabbit mAb过氧化氢异

杠柳毒苷Tri-Methyl-Histone H3 (Lys36) (D5A7) XP® Rabbit mAb多聚酸

1,2-二亚油酰甘油Phospho-Wee1 (Ser642) (D47G5) Rabbit mAb2-甲酰基-氧代酸酯

基-N-酰-β-D-氨基半糖苷Phospho-Wee1 (Ser642) (D47G5) Rabbit mAb2-蒎

2-溴咪唑并[1,2-a]吡Phospho-YAP (Ser127) Antibody甲基酸甲酯

激活素受体1ABcl-xL/FITC  荧光素标记抗Bcl-xL蛋白IgG100 ul

激活素受体2Ap-Bcl-xL(phospho-Ser62)/FITC  荧光素标记抗酸化(Ser62)Bcl-xL蛋白IgG20 ul

激活素受体2BPhospho-Bcl-2 (p-Thr56) /FITC  荧光素标记兔抗、大、Bcl-2IgG100 ul

2号染色体开放阅读框88Phospho-Bcl-2 (p-Ser70) /FITC  荧光素标记兔抗、大、Bcl-2IgG100 ul

G蛋白偶联受体ARHGEF18Bcl-6/Bcl-5/FITC  荧光素标记兔抗、大、原癌基因Bcl-6IgG100 ul

激活素受体1BBcl-10/CLAP/FITC  荧光素标记兔抗、大、Bcl-10IgG20 ul

雄激素受体相关蛋白24Bcl-10(phospho Ser218)/FITC  荧光素标记兔抗、大、Bcl-10IgG100 ul

淀粉样肽前体蛋白（C端）Bcr/CD3D/FITC  荧光素标记兔抗、大、T淋巴细胞受体IgG100 ul

腺苷酸环化酶2Phospho-Bcr(p-Tyr177)/FITC  荧光素标记兔抗、大、T淋巴细胞受体IgG100 ul
停乳链球菌(StD)核酸试剂盒说明书葡糖淀粉酶抗体Trehalose中文名：海藻糖别名：分子式：C12H22O11

G蛋白γ11/Gγ11 抗体Chlorogenic acid中文名：绿原酸别名：分子式：C16H18O9

胃泌素抑制肽受体抗体Ethyl rutiside中文名：芸香糖乙苷别名：分子式：C14H26O10

生长因子受体结合适应蛋白抗体18-Hydroxytritriacontan-16-one中文名：别名：分子式：C33H66O2

GARNL3蛋白抗体Mannitol中文名：甘露醇别名：D-Mannitol; D-甘露醇分子式：C6H14O6
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。