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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 伊氏锥虫(TE)核酸试剂盒价格 |
规格 | 48T |
货号 | LZP8017 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
达非那新DNA-PKcs Antibody溴
达非那新(标准品)DNA-PKcs Antibody5-甲氧基-2-(甲氧基-3,5-二甲基-2-吡啶基)甲基硫代-1H-并咪唑
罗布麻宁;夹竹桃麻素(标准品)TrkB (80E3) Rabbit mAb亚培南(一水物)
罗布麻宁;夹竹桃麻素TrkB (80E3) Rabbit mAb亚酸二酯
虎杖甙/虎杖苷/白藜芦苷Doublecortin Antibody氧杂环丁-
虎杖甙/虎杖苷/白藜芦苷(标准品)Phospho-Doublecortin (Ser297) Antibody酸钴
十八烷,1-十八(标准品)TrkB Antibody酸肼
十八烷,1-十八TrkB (80G2) Rabbit mAb基酸频哪酯
Ruxolitinib (INCB018424)UNC1999基三硅烷
MK-1775,MK1775 MAML1 Antibody2-氧基
PD184352 (CI-1040)Dysbindin Antibody异基二酸二酯
2-脱氧-D-葡萄糖CTMP Antibody银
坎地沙坦MPC2 (D4I7G) Rabbit mAb扎西他滨
Ruxolitinib(INCB018424) phosphaMAML2 Antibody1,5-二羟基萘
SB1317,TG02Sox9 (D8G8H) Rabbit mAb (PE Conjuga)苄氧基
阿齐沙坦Phospho-TrkA (Tyr490)/TrkB (Tyr516) (C35G9) Rabbit mAb维生素 B2
阿齐沙坦(标准品)Phospho-TrkA (Tyr490)/TrkB (Tyr516) (C35G9) Rabbit mAbN-Boc-氨基基溴
伊维菌素(标准品)Histone H3 (D2B12) XP® Rabbit mAb (ChIP Formulad)溴-2-氟
植物花生四酸(AA)ELISA试剂盒AGEs/FITC 荧光素标记晚期糖基化终末产物IgG100 ul
植物过氧化氢酶2(CAT2/CAT)ELISA试剂盒AGER/RAGE/Cy3 荧光素Cy3标记晚期糖基化终末产物特异性受体IgG100 ul
植物钙调素(CaM)ELISA试剂盒Aggrecan/FITC 荧光素标记软骨蛋白聚糖/可聚蛋白多糖IgG20 ul
植物L-抗坏血酸过氧化物酶3,过氧化物酶病(APX3)ELISA试剂盒Aggrecan2/ADAMTS-5/FITC 荧光素标记软骨蛋白聚糖IgG300 ul
植物L-抗坏血酸过氧化物酶2,细胞质(APX2)ELISA试剂盒Agrin/FITC 荧光素标记聚集蛋白IgG100 ul
植物1,5-二酸核酮糖羧化酶/加氧酶(RuBisCO)ELISA试剂盒Agtr1/AT1a/FITC 荧光素标记血管组织血管紧张素Ⅱ1型受体IgG100 ul
植物(拟南芥)超氧化物歧化酶[铜锌]2,叶绿体(CSD2)ELISA试剂盒AGER/Gold 金离子标记的晚期糖基化终末产物特异性受体20 ul
植物(拟南芥)超氧化物歧化酶[铜锌]1(CSD1)ELISA试剂盒Aryl Hydrocarbon Receptor/FITC 荧光素标记芳香烃受体IgG100 ul
植物(拟南芥)超氧化物歧化酶[铁],叶绿体(SODB)ELISA试剂盒Aryl Hydrocarbon Receptor/FITC 荧光素标记芳香烃受体IgG20 ul
伊氏锥虫(TE)核酸试剂盒价格21号染色体开放阅读框63抗体Minumicrolin中文名:别名:分子式:C15H16O5
软骨衍生形态发生蛋白1抗体Murraxocin中文名:别名:分子式:C17H20O5
CD2结合蛋白3抗体Murrangatin diacetate中文名:别名:分子式:C19H20O7
钙调蛋白激酶激酶β抗体8-(1-Chloro-2-hydroxy-3-methylbut-3-enyl)-7-methoxycoumarin中文名:别名:分子式:C15H15ClO4
肿瘤易感性候选基因5抗体Hainanmurpanin中文名:别名:分子式:C17H18O6