注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
卡格列净半水；坎格列净半水Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb5-噻吩-2-甲

5'-二酸胞苷三钠盐Phospho-cdc2 (Tyr15) (10A11) Rabbit mAb5-羧基荧光素

2,二氢并呋喃 EOMES Antibody5-溴并噻唑

dT亚酰单体Phospho-MAP2 (Ser136) Antibody5-溴-2-羧基噻吩

Bz-2'-脱氧胞苷亚酰单体MAP2 Antibody6--吲唑

匹多莫德NY-ESO-1 (D1Q2U) Rabbit mAb6-硝基吲唑

匹多莫德（标准品）Keratin 17 (D73C7) Rabbit mAb7-硝基吲哚

硫酸羟基喹Keratin 17 (D73C7) Rabbit mAbBoc-D-酪氨酸

酰唑Phospho-MAP2 (Thr1620/1623) AntibodyD-2-氨基己二酸

O-6-苄基鸟嘌呤，MGMT 的抑制剂Pan-Keratin (C11) Mouse mAb1,双(二基膦)丁烷

竹红菌甲素(标准品)Pan-Keratin (C11) Mouse mAbD-甘露糖

氟米龙Keratin 8/18 (C51) Mouse mAbD-赖氨酸盐酸盐

氟米龙(标准品)Keratin 8/18 (C51) Mouse mAb1-(二甲氨基基)-基碳二亚盐酸盐

阿西美辛TRIM33 (D7U4F) Rabbit mAb (PE Conjuga)Fmoc-O-叔丁基-L-苏氨酸

阿西美辛(标准品)Phospho-PDGF Receptor α (Tyr1018) AntibodyL-2-氨基丁酰盐酸盐

β-巯基，半胱 Phospho-PDGF Receptor α (Tyr1018) Antibody鸟氨酸

盐酸Keratin 18 (DC10) Mouse mAbL-焦谷氨酸酯

盐酸(标准品)Keratin 18 (DC10) Mouse mAbL-亮氨

胃动素(MTL)ELISA试剂盒ADAM10/MADM/CD156c/FITC  荧光素标记去整合素样金属蛋白酶10IgG100 ul

白蛋白(Albumin)ELISA试剂盒ADAM-TS7/FITC  荧光素标记整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7IgG100 ul

5羟色(5-HT)ELISA试剂盒14-3-3 family proin/FITC  荧光素标记植物14-3-3蛋白IgG20 ul

鹅ELISA试剂盒ADAM-TS7/FITC  荧光素标记兔抗、大、整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-7(N端)IgG100 ul

鹅维生素D3(VD3)ELISA试剂盒ADAM-TS12/FITC  荧光素标记整合素样金属蛋白酶与凝血酶1型-12IgG100 ul

鹅降钙素(CT)ELISA试剂盒ACV-A/FITC  荧光素标记活化素AIgG100 ul

鹅骨钙素/骨谷氨酸蛋白(OT/BGP)ELISA试剂盒Adducin proin/FITC  荧光素标记内收蛋白IgG20 ul

鹅钙结合蛋白(CR)ELISA试剂盒Adenosine A2A-R/FITC  荧光素标记腺苷A2A受体IgG100 ul

貂ELISA试剂盒ADFP/ADRP/adipophilin/FITC  荧光素标记脂肪组织分化相关蛋白IgG100 ul
鼻疽伯克霍尔德菌(BM)核酸试剂盒厂家磷酸化Fas相关死亡结构域蛋白抗体Arjunic acid中文名：别名：分子式：C30H48O5

冷休克蛋白DBPA抗体Myriceric acid B中文名：别名：分子式：C39H54O7

脱帽酶1A抗体3-Epikatonic acid中文名：别名：分子式：C30H48O3

清道夫脱帽酶/热休克蛋白1抗体1-rbetulonic acid中文名：别名：1-Decarboxy-3-oxo-ceathic acid分子式：C29H44O3

干扰素调节因子4结合蛋白抗体Amooracetal中文名：别名：分子式：C32H52O5
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。