注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
孔雀石绿PKM2 (D78A4) XP® Rabbit mAbL-赖氨酸

灿烂绿,亮绿Phospho-Drosophila Akt (Ser505) Antibody6-甲氧基-2,3,4,5-四氢吡啶

甲基绿THEX1 (D66A11) Rabbit mAb2,二-5-甲基吡啶

茜素绿;酸性绿25Phospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAb(R)-缩水甘油

萘酚绿BPhospho-Akt (Thr308) (244F9) Rabbit mAb氧甲酰基亚基三基膦

固绿FCFPhospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb甲酸

子种绿A；蓝APhospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb2-甲氧基基酸

亮绿SF(淡黄)Phospho-Akt (Ser473) (193H12) Rabbit mAb甲氧基酸

健那绿BAkt3 Antibody2,3,4,6-四酰氧基-alpha-D-吡喃葡萄糖溴化物

酸性绿3CNOT3 (D4K4N) Rabbit mAb1-叔丁氧羰基哌

酸性绿 50 Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb-2-吡啶甲酸

酸性绿APhospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAb2-溴蒽醌

吲哚菁绿Phospho-Akt (Ser473) (D9E) XP® Rabbit mAbN-BOC-GAMMA-氨基丁酸

靛蓝N-Cadherin Antibody9-溴菲

甲基蓝CD6 (E9Y7Y) Rabbit mAb戊钠

伊文思蓝；埃文斯蓝MST3b Antibody2-氨基--6-甲氧基嘧啶

曲利蓝LSD1 (1B2E5) Mouse mAb5--2-氟

维多利亚蓝B,性蓝 26CXXC1 (D1R5R) Rabbit mAb2-溴-5-氟

N-甲基-D-天门冬氨酸(NMDA)受体亚单位NR2 ELISA试剂盒TRBF1/TRF1  端粒体复制结合因子1100 ul

N端前脑钠素(NT-proBNP)ELISA试剂盒TREM1  髓系细胞触发受体1100 ul

NOGO-A ELISA试剂盒TREM2  髓系细胞触发受体220 ul

Na-K-ATP酶ELISA试剂盒TREML1/TLT1  髓系细胞触发受体样转录因子1100 ul

NAD(P)H脱氢酶(醌)1(NQO1)ELISA试剂盒TREML2/TLT2  髓系细胞触发受体样转录因子2100 ul

M型肌酸激酶(CKM)ELISA试剂盒Transferrin  转铁蛋白100 ul

L选择素(L-Selectin/CD62L)ELISA试剂盒TRF2  端粒结合蛋白2100 ul

L-酸脱氢酶(L-LDH) ELISA试剂盒omerase Binding Proin, P23  端粒酶结合蛋白P23100 ul

KiSS-1受体(KISS1R)ELISA试剂盒TRIM32  TRIM3220 ul
猪肺炎支原体(MHP)核酸试剂盒价格纤维母细胞生长因子受体底物3抗体7-Acetoxy-4-methylcoumarin中文名：7-乙酰氧基-4-甲基别名：分子式：C12H10O4

纤维连接蛋白抗体Adresterone中文名：肾上腺甾酮别名：分子式：C19H24O3

凝血因子8/第八凝血因子/第八因子相关抗原抗体1-Acetylpiperazine中文名：1-乙酰别名：分子式：C6H12N2O

凝血因子11重链抗体(1S,2R)-2-Ami-1,2-diphenylethal中文名：(1S,2R)-2-氨基-1,2-二苯基乙醇别名：分子式：C14H15

凝血因子12轻链抗体2-Acetylbutyrolactone中文名：2-乙酰基丁内酯别名：分子式：C6H8O3
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。