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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
N-酰甘氨酸NEDD4L Antibody3,二氢-2(1H)-喹啉酮

N-酰-L-氨酸Phospho-p130 Cas (Tyr249) Antibody1-(吡啶基)-(二甲氨基)-2--1-酮

N-酰-D-氨酸CREB (48H2) Rabbit mAb (PE Conjuga)吡啶甲酰肼

N'-对甲磺酰基-L-精氨酸Phospho-p130 Cas (Tyr165) Antibody阿糖腺苷

N-酰-L-谷氨酰TCL1 (1-21) Mouse mAb9-溴-1-壬

N-酰-L-酪氨酸α-Amylase Antibody5－甲酸酯四氮唑

甲基橙(生物染色)PJA2 Antibody5-甲基四氮唑

二甲酚橙四钠盐MCM7 Antibody酸甲酯

半二甲酚橙Tau (Tau46) Mouse mAb硅酸铝钠

吖啶Tau (Tau46) Mouse mAb酚

二安替比林Phospho-Na均三酸

分散橙13PD-L1 (Extracellular Domain Specific) (D8T4X) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 555 Conjuga)2-氨基-5-噻唑盐酸盐

酸性橙74Talin-1 (C45F1) Rabbit mAb对

二甲酚橙Talin-1 (C45F1) Rabbit mAb呋喃酸

煌橙,藏花橙GMMP-2 Antibody甲基-2-吡啶

靛红（吲哚醌）Fyn Antibody苄基肼

新铜试剂(双环己酮草酰二腙)Fyn Antibody氨基甲

奈比洛尔盐酸盐;奈必洛尔Desmin Antibody1,环己二

Toll样受体7(TLR-7)ELISA试剂盒TNFSF4  肿瘤坏死因子配体超家族成员420 ul

Toll样受体4(TLR4)ELISA试剂盒OX40/CD134/TNFRSF4  CD134100 ul

toll样受体3(TLR3)ELISA试剂盒TNF-beta  肿瘤坏死因子-β20 ul

toll样受体1(TLR1)ELISA试剂盒TNFAIP1  肿瘤坏死因子α诱导蛋白1100 ul

TGF-β诱导早期基因1(TIEG1)ELISA试剂盒TNFSF14  肿瘤坏死因子配体超家族成员14100 ul

Tau蛋白ELISA试剂盒TNFAIP3  肿瘤坏死因子α诱导蛋白320 ul

TAR DNA结合蛋白43(TARDBP)ELISA试剂盒Acetylad-p53 (Lys382)  酰化P53(Lys382)100 ul

Syndecan-1/CD138(SDC1)ELISA试剂盒TNFSF18  肿瘤坏死因子配体超家族成员18100 ul

Smad7 ELISA试剂盒HVEM/TNFRSF14  肿瘤坏死因子受体超家族成员14100 ul
丹毒杆菌(SER)核酸试剂盒厂家鸟嘌呤核苷酸交换因子GEFT抗体21-Deoxyneridiene B中文名：别名：20R-Hydroxypregna-4,6-diene-3,12-dione分子式：C21H28O3

胶浆成熟因子β抗体Dehydroadynerigenin glucosyldigitaloside中文名：别名：分子式：C36H52O13

蛋白偶联受体56抗体Tenacigeside A中文名：别名：17-Epitenacissoside F; 3-O-Pachybiosyl-17-epitenacigenin B分子式：C35H56O12

肠和大脑特定同源蛋白2抗体Daturataturin A aglycone中文名：别名：Desglucodaturataturin A; 7,27-Dihydroxy-1-oxowitha-2,5,24-trielide分子式：C28H38O5

甘氨酸转运蛋白1抗体6-Hydroxystigmasta-4,22-dien-3-one中文名：别名：分子式：C29H46O2