注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
L-酪氨酸甲酯TRADD Antibody米诺地尔

L-半胱氨酸酯盐酸盐LIN28A (D84C11) XP® Rabbit mAb二酸单甲酯盐

L-氨酸酯盐酸盐GATA-4 (D3A3M) Rabbit mAb2-羟基嘧啶盐酸盐

甘氨酸酯盐酸盐DR5 Antibody2-溴-4'-(三氟甲基)酮

L-蛋氨酸酯盐酸盐;L-甲硫氨酸酯盐酸盐FLCN (D14G9) Rabbit mAb二氟酸酯

L-酪氨酸酯盐酸盐p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb2-硝基三氟甲

L-天冬氨酸-β-苄酯/L-天冬氨酸-苄酯p27 Kip1 (SX53G8.5) Mouse mAb1,2-二氢-2-异丁氧基喹啉-1-甲酸异丁酯

L-谷氨酸-γ-苄酯MyD88 Antibody甲氧基酸甲酯

L-氨酸苄酯盐酸盐β-Actin (8H10D10) Mouse mAb2-巯基烟酸

L-脯氨酸苄酯盐酸盐β-Actin (8H10D10) Mouse mAb甲基-5-羟甲基咪唑盐酸盐

L-精氨酸-L-谷氨酸盐TRAIL (C92B9) Rabbit mAb (PE Conjuga)5-羟甲基噻唑

L-精氨酸-α-酮戊二酸盐（2:1）GRB10 Antibody(二甲氨基)缩二甲

S-酰半胱氨酸盐酸Phospho-SHP-2 (Tyr580) Antibody(3AR,4R,5R,6AS)-基六氢-2-氧代-2H-环戊并[B]呋喃-5-基 [1,1'-联]-甲酸酯

O-叔丁基-L-苏氨酸甲酯盐酸盐ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb2,二氨基-5-溴吡啶

L-氨酸异酯盐酸盐ZO-3 (D57G7) XP® Rabbit mAb甲基-2-并噻唑啉酮腙盐酸盐水合物

L-精氨酸叔丁酯TNF-α Antibody-硝

L-天冬酰甲酯盐酸盐JNK1 (2C6) Mouse mAb2-酸

L-天冬氨酸二叔丁基酯盐酸盐TGF-β (56E4) Rabbit mAb硫代吗啉-1,1-二氧化物

低密度脂蛋白受体(LDLR)ELISA试剂盒TPA/PLAT  组织型纤溶酶原激活剂100 ul

低密度脂蛋白免疫复合物(LDL-IC)ELISA试剂盒SUZ12/CHET9  胚胎干细胞抑制蛋白Suz12100 ul

低密度脂蛋白胆固(LDL-C)ELISA试剂盒SP-A   肺表面活性蛋白A20 ul

低密度脂蛋白(LDL)ELISA试剂盒SPA-1/SIPA-1  信号感应增殖相关蛋白1100 ul

的牛血清白蛋白残留检测ELISA试剂盒SPAG5/map126/Astrin  相关抗原5100 ul

蛋白酸酶(PP)ELISA试剂盒SPARC  富含半胱氨酸的酸性分泌蛋白100 ul

蛋白聚糖4(PRG4)ELISA试剂盒SP-B  肺表面活性蛋白B20 ul

蛋白激酶G(PKG)ELISA试剂盒SP-D  肺表面活性蛋白D100 ul

蛋白激酶C(PKC)ELISA试剂盒Spectrin-Alpha  血影蛋白/收缩蛋白100 ul
荧光定量PCR试剂盒β-乳球蛋白抗体Myricetin中文名：杨梅素别名：分子式：C15H10O8

磷酸化β 连环素蛋白抗体Isorhamnetin中文名：异鼠李素别名：Quercetin 3'-methyl ether分子式：C16H12O7

丁酰胆碱酯酶单克隆抗体7,4'-Di-O-methylapigenin 5-O-glucoside中文名：别名：分子式：C23H24O10

BADH2抗体(稻)Chrysoeriol中文名：柯伊利素别名：金圣草黄素分子式：C16H12O6

β-酪蛋白抗体Lethedoside A中文名：别名：5-Hydroxy-3',4',7-trimethoxyflavone 5-O-glucoside分子式：C24H26O11
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。