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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:
1.基础程序;
2.扩增温度和延伸温度;
3.反应时间;
4.循环次数;
5.PCR 反应液的配制;
6.PCR技术的基本原理;
7.PCR的反应动力学;
8.PCR扩增产物;
9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 猪肺炎支原体PCR检测试剂盒价格 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7897 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
二甲基二硫代氨酸锌(>95.0%(T))GSTP1 (3F2) Mouse mAb异噻唑啉酮
并红紫4B[pH指示剂]Phospho-Tyrosine Hydroxylase (Ser31) Antibody5-溴-2,二氟甲
间甲酚紫钠盐[pH指示剂]Phospho-Erk5 (Thr218/Tyr220) Antibody硝基苄盐酸盐
五甲氧基红(>98.0%(HPLC))Phospho-Erk5 (Thr218/Tyr220) Antibody溴苄盐酸盐
甲基橙(>95.0%(W))Erk5 Antibody6--1-羟基并三氮唑
溴酚蓝[pH指示剂]Cathepsin B (G60) Antibody6-溴烟酸甲酯
基橙[pH指示剂]TrkC (C44H5) Rabbit mAb6-甲氧基烟酸甲酯
氧基橘红盐酸盐(>95.0%(T))SimpleChIP® Human HUWE1 Intron 26 Control Primers三环己基膦
2,5-二酚(加约20%水湿润,本品干重约为5g)(>99.0%(T))Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb2-甲
间二酚蓝[pH指示剂]Phospho-Histone H3 (Ser10) (D2C8) XP® Rabbit mAb酸薄荷酯
2-酚钠盐(>99.0%(HPLC)(T))PCAF (C14G9) Rabbit mAbalpha-溴-甲氧基酮
甲酚红钠盐[pH指示剂]PCAF (C14G9) Rabbit mAb2-疏基吡啶
双(2,二)酸酯(>98.0%(HPLC))PRMT4/CARM1 (C31G9) Rabbit mAb4,4'-偶氮双(基戊酸)
(1R,2R)-2-(萘-2,二甲酰亚基)环己甲酸(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-NMDA Receptor 1 (GluN1) (Ser890) AntibodyH-ORN(CBZ)-OH
(1S,2S)-2-(萘-2,二甲酰亚基)环己甲酸(>98.0%(HPLC)(T))NHERF1 (A140) Antibody2,5-二氟甲
(1S,2S)-2-(蒽-2,二甲酰亚基)环己甲酸(>97.0%(HPLC))
Cathepsin B (H190) Antibody (Mouse Preferred)甲基环戊二二聚体
Nα-(5-氟-2,二基)-L-亮氨酰(>98.0%(HPLC))Phospho-NMDA Receptor 1 (GluN1) (Ser896) AntibodyN-苄氧羰基-L-谷氨酰
Nα-(2,二硝基-5-氟基)-D-亮氨酰铵(>98.0%(HPLC))Phospho-NMDA Receptor 1 (GluN1) (Ser897) Antibody硝基吡唑
性成纤维细胞生长因子6(bFGF-6)ELISA试剂盒Parvalbumin 细小清蛋白20 ul
性成纤维细胞生长因子4(bFGF-4)ELISA试剂盒PTTG 垂体肿瘤转化基因1Kit
性成纤维生长因子(bFGF)ELISA试剂盒Peptide YY/PYY 酪酪肽100 ul
甲状腺素(TAb)ELISA试剂盒Rad17 细胞周期检控Rad17蛋白100 ul
甲状腺素(T4)ELISA试剂盒Phospho-Rad17 (Ser645) 酸化细胞周期检控Rad17蛋白100 ul
甲状腺球蛋白IgGELISA试剂盒Rad51 Rad5120 ul
甲状腺球蛋白(TG)ELISA试剂盒Rad52 Rad52100 ul
甲状腺过氧化物酶(TPO)IgGELISA试剂盒RAD51C 癌和卵巢癌易感基因RAD51C100 ul
甲状腺过氧化物酶(TPO)ELISA试剂盒RAP1A 抗Rap1A100 ul
猪肺炎支原体PCR检测试剂盒价格钙激活氯离子通道4抗体Tachioside中文名:别名:分子式:C13H18O8
非受体酪氨酸激酶c-Abl抗体2,4-Dihydroxyphenylacetic acid中文名:2,4-二羟基别名:2,4-Dihydroxybenzeneacetic acid分子式:C8H8O4
2号染色体开放阅读框65抗体5,7-Dihydroxy-2-isopropylchromone中文名:别名:分子式:C12H12O4
富半胱氨酸肝素结合蛋白61抗体Piceatanl中文名:白皮杉醇别名:3,3',4,5'-Tetrahydroxystilbene分子式:C14H12O4
细胞角蛋白5+6抗体Nervogenic acid中文名:别名:4-Hydroxy-3,5-diprenylbenzoic acid分子式:C17H22O3