注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
(0.105mg/ml)Argonau 2 (C34C6) Rabbit mAb5-羟基吡-2-羧酸甲酯

(10μg/ml,u=6～5%,酮)Argonau 2 (C34C6) Rabbit mAbFmoc-L-赖氨酸盐酸盐

敌稗标准溶液(0.100mg/ml)Bim (C34C5) Rabbit mAb (Alexa Fluor® 700 Conjuga)三氟甲氧基酸

伏杀硫(标准品)CTCF Antibody2-溴-5-基吡啶

伏杀硫标准溶液(10μg/ml,u=7～3%,酮)Phospho-YB1 (Ser102) (C34A2) Rabbit mAb溴异烟酸

克螨特标准溶液(1.00mg/ml)IQGAP1 (D6E3J) Rabbit mAb氨基二

三杀虫酯标准溶液(10μg/ml,u=2%)Di-Methyl-Histone H3 (Lys36) (C75H12) Rabbit mAb环磺酰

三杀虫酯标准溶液(100μg/ml,u=2%)Di-Methyl-Histone H3 (Lys36) (C75H12) Rabbit mAb5-(2-氧基)-1-甲基-基-1,6-二氢-7H-吡唑并[4,D]嘧啶-7-酮

霜霉(分析标准品,99%)Phospho-PLCbeta3 (Ser537) (D8K2R) Rabbit mAb两性霉素 B

多联(Aroclor 1248)标样(100μg/mL,基体:甲)ASF1B (C70E2) Rabbit mAb氟-2-酸

多联(Aroclor 1221)标样(100.0μg/mL,基体:甲)p70 S6 Kinase Substras Antibody Sampler Kit5-溴-2-甲氧基嘧啶

多联(Aroclor 1242)标样(100μg/mL,基体:甲)Phospho-IRF-3 (Ser396) (D6O1M) Rabbit mAb基胍碳酸盐

多联 (Aroclor 1254)标样(100μg/mL,基体:甲)VEGF Receptor 2 Control Proins三酰酮铁

甲基毒死蜱标准溶液(10μg/ml,u=6～4%,酮)IKKε (D20G4) Rabbit mAbN-氨基哌

解毒喹(标准品)IKKε (D20G4) Rabbit mAb羧基酸

绿麦隆标准溶液(100μg/ml,u=4%)Pim-1 Antibody盐酸万古霉素

丹溶液(基体：异辛烷)PhosphoPlus®α-Synuclein (Ser129) Antibody Duet硫酸多粘菌素 B

敌草隆(99%)SBI-0206965代二酸二酯

牛甜菜-同型半胱氨酸S-甲基转移酶1(BHMT)ELISA试剂盒Phospho-SEK1/MKK4 (Thr261)  酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4100 ul

牛胎盘生长因子(PGF)ELISA试剂盒Phospho-SEK1/MKK4 (Ser257/Thr261)  酸化丝裂原活化蛋白激酶激酶4100 ul

牛羧化不全骨钙素(ucOC)ELISA试剂盒MEK6  丝裂原活化蛋白激酶MKK6100 ul

牛双氢睾酮(DHT)ELISA试剂盒Phospho-MEK6 (Ser207)  酸化丝裂原活化蛋白激酶MKK6300 ul

牛瘦素(LEP)ELISA试剂盒Phospho-MEK6 (Ser202)  酸化丝裂原活化蛋白激酶MKK6100 ul

牛生长抑素(SS)ELISA试剂盒MKK7/ERK7  丝裂原活化蛋白激酶MKK7100 ul

牛生长激素释放多肽(GHRP)ELISA试剂盒Phospho-MKK7 (Ser271/Thr275)  酸化丝裂原活化蛋白激酶MKK720 ul

牛生长激素(GH)ELISA试剂盒P53(wt-p53)  肿瘤抑制基因（野生型P53）100 ul

牛肾上腺髓质素(ADM)ELISA试剂盒P53(wt-p53)  肿瘤抑制基因（野生型P53）300 ul
乙型流感病毒PCR检测试剂盒厂家无胸腺症相关蛋白DGCR6/迪格奥尔格综合征关键基因6抗体3β-Hydroxyurs-11-en-28,13β-olide中文名：别名：11,12-Dehydroursolic acid lactone分子式：C30H46O3

朊蛋白DPL抗体Pomolic acid中文名：坡模酸别名：3,19-Dihydroxy-12-ursen-28-oic acid分子式：C30H48O4

肌强直性营养不良蛋白激酶抗体Betulin中文名：白桦脂醇别名：20(29)-Lupene-3,28-diol分子式：C30H50O2

神经干细胞树突调节蛋白DAGLα抗体Betulinic acid中文名：白桦脂酸别名：桦木酸; 白桦酸分子式：C30H48O3

双皮层蛋白结构域蛋白DCDC2抗体Tereticornate A中文名：别名：分子式：C40H54O6
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。