注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
3,5-二甲酰(>99.0%(T))Aurora A/AIK Antibody2-溴-6-三氟甲基吡啶

2,二肼盐酸盐(>98.0%(HPLC)(T))Aurora B/AIM1 Antibody1-Boc-甲基-哌啶甲酸

O-硝基苄基羟盐酸盐(>99.0%(HPLC),用于高效液相色谱标记)Aurora B/AIM1 AntibodyBOC-D-氨酸

氮磺酰肼(>99.0%(HPLC),用于高效液相色谱标记)Phospho-c-Abl (Tyr89) (61A6) Rabbit mAb氟--5-甲

7-酰氧基-溴甲基(>98.0%(HPLC)(T),用于高效液相色谱标)JMJD1B (C6D12) Rabbit mAb2-溴苄

Br-Mmc (=溴甲基-7-甲氧基)(>98.0%(T))IGFBP1 (D4E9T) XP® Rabbit mAbA,A二基Β苦基肼基游离基

溴甲基-7-甲氧基-1,并恶-2-酮(>98.0%(T))IGFBP1 (D4E9T) XP® Rabbit mAb无水柠檬酸单钠盐

DBD-PZ [=(N,N-二甲氨基磺酰基)-7-哌-2,1,并恶二唑](>98.0%(HPLC))Smad2/3 AntibodyN-甲基-氨基吡唑

溴甲基-6,7-二甲氧基(>98.0%(HPLC))Smad2 (L16D3) Mouse mAb2,6-二氨基嘌呤

 DBD-CO-Hz [=(N,N-二甲基氨基磺酰)-7-(N-肼基羰甲基-N-甲基)氨基-2,1,并恶二唑](>98.0%(HPLC))

Phospho-Smad2 (Ser245/250/255) Antibody溴-甲氧基

NBD-CO-Hz [=(N-肼羰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,并恶二唑](>95.0%(HPLC))Di-Methyl-Histone H3 (Lys9) (D85B4) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)溴-甲氧基

DBD-ED [=(N,N-二甲氨基磺酰)-7-(2-氨基基氨基)-2,1,并恶二唑]PKM1/2 (C5E6) Rabbit mAb氟-2-甲氧基

AABD-SH (=酰氨基-7-巯基-2,1,并恶二唑](>94.0%(HPLC))Phospho-Smad2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAbD-(+)-二对甲氧基甲酰

9-(溴甲基)丫啶(>98.0%(HPLC)(T))Phospho-Smad2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAb3,4,5-*氧基甲酸甲酯

DBD-COCl [=(N,N-二甲基氨磺酰)-7-(N-甲酰甲基-N-甲氨基)-2,1,并恶二唑](>98.0%(T))Phospho-Smad2 (Ser465/467) (138D4) Rabbit mAb3,5-二甲氧基

NBD-COCl [=(N-甲酰甲基-N-甲氨基)-7-硝基-2,1,并恶二唑](>92.0%(T))SimpleChIP® Human MRPL36 Promor Primers麦草畏

DBD-NCS [=(N,N-二甲基氨磺酰)-7-异硫酸基-2,1,并恶二唑]IFN-α (6B18) Mouse mAb2-噻吩酸

甲酸-9-芴甲酯(>97.0%(HPLC)(T))Phospho-VASP (Ser157) Antibody-2-基吡啶

鸡核因子κB受体活化因子(RANK)ELISA试剂盒PDK1/PDPK1  3酸肌醇依赖性蛋白激酶1100 ul

鸡核因子-κB(NF-κB)ELISA试剂盒Phospho-PDK1 (Ser241)  酸化3酸肌醇依赖性蛋白激酶1100 ul

鸡过氧化物酶体增殖因子活化受体γ(PPAR-γ)ELISA ELISA试剂盒Phospho-PDK1 (Tyr373/376)  酸化3酸肌醇依赖性蛋白激酶1100 ul

鸡过氧化物酶体增殖因子活化受体B(PPAR-B)ELISA试剂盒Pdk4  丙酮酸脱氢酶激酶420 ul

鸡过氧化物酶体增殖因子活化受体A(PPAR-A)ELISA试剂盒PDX1  胰十二指肠同源异型盒基因100 ul

鸡过氧化氢酶ELISA试剂盒PEA3  瘤促活化因子3100 ul

鸡谷胱甘肽过氧化物酶8(GPX-8)ELISA试剂盒Pectinesrase  果胶酶100 ul

鸡弓形虫循环抗原(TCA)ELISA试剂盒PEA15  星形胶质细胞PEA15100 ul

鸡睾酮(T)ELISA试剂盒Phospho-PEA15 (Ser104)  酸化星形胶质细胞PEA15100 ul
玉米MONPCR检测试剂盒规格甘氨酸受体β/GlyR β抗体Tauroursodeoxycholic acid中文名：牛磺熊去氧胆酸别名：TUDCA; 牛磺熊脱氧胆酸分子式：C26H456S

细胞核因子GCNF/维甲酸受体相关受体抗体Lithocholic acid中文名：石胆酸别名：分子式：C24H40O3

G蛋白转录因子α2/Gα t2抗体Citrostadiel中文名：柠檬二烯醇别名：分子式：C30H50O

脊髓性肌症蛋白SMA抗体Cyasterone中文名：杯苋甾酮别名：分子式：C29H44O8

转录因子Gli2抗体Resibufogenin中文名：脂蟾毒配基别名：分子式：C24H32O4
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。