注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
​
实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
甲酸异丁酯(>98.0%(T))Phospho-MAPKAPK-2 (Thr334) Antibody5-氟-2-甲氧基酸

二茂铁酸(含有数量不等的酸酐)(>98.0%(HPLC))

[用于气相色谱]MAPKAPK-2 Antibody2-(1H-吡唑-基)

五氟苄溴(>98.0%(GC))MAPKAPK-3 Antibody2,6-二氟甲酰

O-(2,3,4,5,6-五氟苄基)羟盐酸盐(>98.0%(HPLC)(N))Acetyl-NF-κB p65 (Lys310) Antibody2,6-二氟甲酰

己烷(>99.5%(GC),标准物)LKB1 (D60C5) Rabbit mAb溴哌啶-1-甲酸叔丁酯

壬烷(>99.5%(GC),标准物)Phospho-MYPT1 (Ser668) Antibody亚酸二异酯

癸烷(>99.5%(GC),标准物)Bub3 Antibody6-溴-2-喹啉

二十烷(>99.5%(GC),标准物)LKB1 (27D10) Rabbit mAb氨基甲酸叔丁酯

二十一烷(>99.0%(GC)，标准物质)NTF2 (5A3) Mouse mAb*基硅咪唑

二十二烷(>99.0%(GC)，标准物质)Phospho-LKB1 (Thr189) AntibodyN2-芴甲氧羰基-L-2,二氨基酸

二十三烷(>99.0%(GC)，标准物质)CBX4 (E6L7X) Rabbit mAb丁酸

二十四烷(>99.0%(GC)，标准物质)Phospho-LKB1 (Ser334) Antibody*基硅甲基锂

二十五烷(>99.0%(GC)，标准物质)Phospho-EGF Receptor (Thr669) Antibody甲基吡啶盐酸盐

酸甲酯(>99.5%(GC),标准物质)NEK7 (C34C3) Rabbit mAb1,3,5-三(溴甲基)

丁酸甲酯(>99.5%(GC),标准物质)NEK7 (C34C3) Rabbit mAb氟-三氟基酸

庚酸甲酯(>99.5%(GC),标准物质)HSPB8/HSP22 Antibody二氧化锡

正辛酸甲酯(>99.5%(GC),标准物质)Phospho-Na苄

壬酸甲酯(>99.5%(GC),标准物质)Phospho-PDK1 (Ser241) Antibody3,二溴

马免疫球蛋白E(IgE)ELISA试剂盒R-cadherin  R-钙粘附分子100 ul

马锰超氧化物歧化酶(Mn-SOD/SOD2)ELISA试剂盒LI-cadherin  肝肠钙粘连蛋白100 ul

马ELISA试剂盒PCNA  增殖细胞核抗原100 ul

马结合珠蛋白/触珠蛋白(Hpt/HP)ELISA试剂盒PCNA  增殖细胞核抗原100 ul

马窖蛋白Caveolin-1(CAV1)ELISA试剂盒PDCD4  凋亡相关蛋白4100 ul

马黄体生成素(LH)ELISA试剂盒PCNA-Proliferation Marker  增殖细胞核抗原100 ul

马环酸腺苷(cAMP)ELISA试剂盒TFAR19/PDCD5  凋亡相关蛋白TFAR19100 ul

马环酸鸟苷(cGMP)ELISA试剂盒PCNA-Proliferation Marker  增殖细胞核抗原100 ul

马过氧化氢酶(CAT)ELISA试剂盒phosphos-PCNA (Tyr211)   酸化增殖细胞核抗原100 ul
玉米CBH-PCR检测试剂盒价格C型凝集素4家族E抗体3-Prenyl-2,4,6-trihydroxybenzophene中文名：别名：分子式：C18H18O4

毒蕈碱型乙酰胆碱受体抗体Albaspidin AA中文名：白绵马素AA别名：分子式：C21H24O8

促进凋亡基因抗体Cotoin中文名：别名：2,6-Dihydroxy-4-methoxybenzophene分子式：C14H12O4

原癌基因蛋白/活化蛋白1抗体2,3',4,6-Tetrahydroxybenzophene中文名：别名：分子式：C13H10O5

细胞角蛋白19抗体Dehydroespeletone中文名：别名：4-Methoxy-3-(3-methyl-2-buteyl)acetophene分子式：C14H16O3
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。