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注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 蟹特定基因序列PCR检测试剂盒价格 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7841 |
组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。
四甲基硫酸氢铵(离子色谱级,≥99.0%(T))PAK3 Antibody羟基磺酸钠
三(LC-MS淋洗剂,≥99.5%(GC))PAK3 Antibody代叔丁烷
四基溴化铵(离子对色谱级)PTMScan® Glutaryl-Lysine [Glut-K] Kit6,6'-二甲基-2,2'-联吡啶
四丁基化铵(离子对色谱级)PRAS40 Antibody二醋酸酯
三辛(离子对试剂)Phospho-PRK1 (Thr774)/PRK2 (Thr816) Antibody5-甲基异噁唑-酰氨
甲酸钠(for HPLC,≥99.0%(NT))PRK2 Antibody4,5-二氨基-6-巯基嘧啶
1-己烷磺酸钠(离子对色谱级,>98.0%(T))HP1β Antibody2-溴酰
高酸钠,无水(for HPLC,99.0%)Pan-Calcineurin A Antibody氟磺酰基二甲酯
四甲基溴化铵(离子对色谱级,≥99.0%(AT))PAK2 (C17A10) Rabbit mAb三氟
三溴(光谱级,>99.0%(GC))PAK2 (C17A10) Rabbit mAb3,二
草酸钠容量分析用溶液标准物质(0.05M)HP1α Antibody对甲氧基甲酸酯
氢氧化钠容量分析用标准溶液(0.0997mol/L)eIF4G (C65H5) Rabbit mAb三羟甲基氨烷马来酸酯
刚果红(分析标准品,≥97.0%(HPLC))HP1γ Antibody(2S,5S)-2,5-己二
正癸酸(分析标准品,≥99.5%(GC))Jagged1 (28H8) Rabbit mAb并[B]噻吩-酸
异丁酸(分析标准品,>99.5%(GC))Jagged1 (28H8) Rabbit mAb2-(1H-吡唑-1-基)酸
甲基反亚油酸甲酯(分析标准品)CD161/KLRB1 (HP-3G10) Mouse mAb (PerCP-Cy5.5® Conjuga)N-BOC-L-1,2,3,四氢异喹啉-羧酸
肉豆蔻酸甲酯(分析标准品,≥99.5%(GC))JMJD1B/JHDM2B Antibody2-氨基-5-溴甲酰
三聚(分析标准品,≥99.9%(HPLC))GST Antibody5-溴-2-氟三氟甲
8异(8-iso-PG)ELISA试剂盒NEDD4L/NEDD4-2 泛素连接酶NEDD4-2100 ul
8-异构F2α(8-epi-PGF2α)ELISA试剂盒Phospho-NEDD4L (Ser342) 酸化泛素连接酶NEDD4-2100 ul
8羟基脱氧鸟苷(8-OHdG)ELISA试剂盒NCoR2 核受体辅助抑制因子2100 ul
8-羟基鸟嘌呤DNA糖苷酶(OGG1)ELISA试剂盒NEP/MME 金属肽链内切酶100 ul
6酮F1a(6-keto-PGF1a)ELISA试剂盒NDRG1/Cap43 分化相关基因NDRG1100 ul
6酮(6-K-PG)ELISA试剂盒Phospho-NDRG1 (Ser330) 酸化分化相关基因NDRG1100 ul
6-羟多巴(6-OHDA)ELISA试剂盒Phospho-NDRG1 (Thr346) 酸化分化相关基因NDRG120 ul
60S核糖体蛋白L36a-样(RPL36AL)ELISA试剂盒NDRG2 抑癌基因NDRG2100 ul
60S核糖体蛋白L17(RPL17)ELISA试剂盒NDRG3 抑癌基因NDRG3100 ul
蟹特定基因序列PCR检测试剂盒价格人黏膜地址素细胞黏附分子(MAdCAM-1)ELISA试剂盒英文名称:Human mucosal addressin cell adhesion molecule-1,MAdCAM-1 ELISA Kit进口/原装
人黏着斑激酶(FAK)ELISA试剂盒英文名称:Human focal adhesion kinase,FAK ELISA Kit进口/原装
人鸟氨酸氨基甲酰转移酶(OCT)ELISA试剂盒英文名称:Human ornithine carbamoyl transferase,OCT ELISA Kit进口/原装
人鸟氨酸脱羧酶(ODC)ELISA试剂盒英文名称:Human Ornithine decarboxylase,ODC ELISA Kit进口/原装
人鸟苷酸交换因子(GEF)ELISA试剂盒 英文名称:Human Guanine Exchange Factor,GEF ELISA Kit*
人鸟苷酸结合蛋白4(Gbp4)ELISA试剂盒英文名称:human guanylate nucleotide binding protein 4,Gbp4 ELISA Kit*小鼠维生素B12(VB12)ELISA试剂盒 组装/原装
小鼠维生素A(VA)ELISA试剂盒 组装/原装
小鼠病毒(MVM)ELISA试剂盒 组装/原装
小鼠网膜素(omein)ELISA试剂盒 组装/原装
检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。