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组成及试剂配制:
1、酶标板:一块(96孔)
2、 标准品(冻干品): 2瓶,请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml,盖好后室温静置大约10分钟,同时反复颠倒/搓动以助溶解,其浓度为200 U/L,然后做系列倍比稀释(注:不要直接在板中进行倍比稀释),分别配制成200 U/L,100 U/L,50 U/L,25 U/L,12.5 U/L,6.25 U/L,3.12 U/L,样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品:取0.3ml (不要少于0.3ml )200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中,混匀即可,其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液:1×20ml。
4、 检测稀释液A:1×10ml。
5、 检测稀释液B:1×10ml。
注意事项:1.基础程序;2.扩增温度和延伸温度;3.反应时间;4.循环次数;5.PCR 反应液的配制;6.PCR技术的基本原理;7.PCR的反应动力学;8.PCR扩增产物;9.PCR反应体系与反应条件。
产品名称 | 土拉杆菌PCR检测试剂盒说明书 |
规格 | 50T |
货号 | LZP7823 |
实验过程:
一、试剂准备
1. DNA模板
2.对应目的基因的特异引物(在PCR反应中,新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制,而不能从无到有,凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA,一般20多bp,需要根据你的模板链设计。因此,扩增不同的基因需要设计不同的引物)
3.10×PCR Buffer
4.2mM dNTPmix:含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5.Taq酶
二、操作步骤
1.在冰浴中,按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer 5μl
dNTP mixl 4μl
引物1(10pM) 2μl
引物2(10PM) 2μl
Taq酶(2U/μl) 1μl
DNA模板(50ng-1μg/μl) 1 μl
加ddH2O至 50 μl
视PCR仪有无热盖,不加或添加石蜡油。
2.调整好反应程序。将上述混合液稍加离心,立即置PCR仪上,执行扩增。一般:在93℃预变性3-5min,进入循环扩增阶段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循环30-35次,zui后在72℃ 保温7min。
3.结束反应,PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4.PCR的电泳检测:如在反应管中加有石蜡油,需用100μlLuFang进行抽提反应混合液,以除去石蜡油;否则,直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
1.PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
2.纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言,只要能够得到可靠的结果,纯化的方法越简单越好。
3.所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
4.PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水,采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
5.试剂都应该以大体积配制,试验一下是否满意,然后分装成仅够一次使用的量储存,从而确保实验与实验之间的连续性。
6.试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子,玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
7.PCR的样品应在冰浴上化开,并且要充分混匀。检测步骤:
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX),冰上融化并振荡混匀后,10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照),每个测试反应体系配制如下表:
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
(1) 计算好各试剂的使用量,加入一适当体积洁净离心管中,充分混匀,10000rpm离心10s,向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液,向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL,10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团:设置为FAM。淬灭基团:NONE,请勿选择ROX参比荧光。
钕标准溶液(1000µg/mL,基体:10%HCl)FastScan™ Total Zap-70 ELISA Kit2--吡啶
标准溶液(100µg/mL,基体:1%HCl)Wnt5a Antibody5-溴-6-烟酸甲酯
标准溶液(1000μg/ml,,溶剂:水)PDE5 Antibody5-溴-2-烟酸甲酯
镨标准溶液(1000µg/mL,基体:10%HCl)MBP Tag (8G1) Mouse mAb4,4'-二酰联
硒标准溶液(100mg/L,溶剂:水)PhosphoPlus® ULK1 (Ser757) Antibody Duet氨基-基吡啶
锶标准溶液(1000μg/ml)Vav3 Antibody2,二
钛标准溶液(100µg/ml)Rap1A/Rap1B (26B4) Rabbit mAb1-(2-氟-5-基)-1-酮
钨标准溶液(1000μg/ml,基体:0.1mol/LNaOH)Synip (C51G6) Rabbit mAb5-羟基-1,二
钽标准溶液(1000μg/ml)Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody2-溴噻吩-5-甲
碲标准溶液(1000μg/ml)Phospho-HSP27 (Ser82) AntibodyN-甲基-2-甲氧基苄
铽标准溶液(1000µg/mL,基体:10%HCl)HSP27 (G31) Mouse mAb2-氟-6-溴
钒标准溶液(1000μg/ml,溶剂:0.5mol/L HNO3)HSP27 (G31) Mouse mAb6-溴吲唑
钇标准溶液(1000μg/ml in 10% HCl)BCAR3 Antibody异基酸
锌标准溶液(1000μg/ml,基体:1mol/L HNO3)Phospho-HSP27 (Ser15) AntibodyN-CBZ-哌啶酸酯
锌标准溶液(100µg/ml,,基体:1%HNO3)Phospho-HSP27 (Ser15) Antibody氨基基酸
化锌标准溶液(0.1000mol/L)Phospho-HSP27 (Ser78) Antibody2-氨基-氟
邻二甲(for HPLC,≥96.0% (GC))Phospho-HSP27 (Ser78) Antibody5-溴-2-甲氧基甲
蚜灭标准溶液(0.100mg/ml)Phospho-HSP27 (Ser82) Antibody II7-羟基-1H-吲唑
L-肾上腺素ELISA试剂盒HCMV UL23 巨细胞病毒UL23100 ul
L-酸脱氢酶(L-LDH)ELISA试剂盒HCMV UL49 巨细胞病毒UL49蛋白100 ul
L-氨基酸氧化酶(LAO)ELISA试剂盒MCP-1/CCL2 单核细胞趋化蛋白1(大、)100 ul
Klotho ELISA试剂盒MCP-1/CCL2 单核细胞趋化蛋白1()100 ul
KI-67抗原(Ki-67)ELISA试剂盒MCP-2/CCL8 单核细胞趋化蛋白2()100 ul
Jo1/抗组氨酰tRNA合成酶(Jo1/HRS)ELISA试剂盒MCP-2/CCL8 单核细胞趋化蛋白2(大、)20 ul
IV形胶原蛋白α3链(COL4A3)ELISA试剂盒MCP-3/CCL7 单核细胞趋化蛋白3100 ul
Igγ3链C区(IGHG3)ELISA试剂盒MCP-3/CCL7 单核细胞趋化蛋白3100 ul
ICOS配体(ICOSLG)ELISA试剂盒CCL9/CCL10 巨噬细胞炎症蛋白-1γ100 ul
土拉杆菌PCR检测试剂盒说明书1号染色体开放阅读框86抗体Salaspermic acid中文名:大子五层龙酸别名:分子式:C30H48O4
8号染色体开放阅读框59抗体Quillaic acid中文名:皂树酸别名:分子式:C30H46O5
磷酸化CD151抗体Rubiprasin A中文名:别名:分子式:C32H52O5
杀菌肽/天蚕抗菌肽单克隆抗体Ginseside Rb1中文名:人参皂苷Rb1别名:Gypeside III分子式:C54H92O23
细胞周期蛋白依赖性激酶样3抗体Rubiprasin B中文名:别名:分子式:C32H52O4