注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
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实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。
仲丁(Standard for GC,≥99.8%(GC))Mnk1 (C4C1) Rabbit mAb(R)-1,2-

联(Standard for GC,>99.5%(GC))ESET (C1C12) Rabbit mAb4,二甲基环己酮

1，丁二(BDO)(standard for GC,≥99%(GC))ESET (C1C12) Rabbit mAb6-尿嘧啶

正丁酸(Standard for GC,>99.5%(GC))Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb叔丁基马来酸酯

正丁(Standard for GC,≥99.7%(GC))Phospho-Chk2 (Thr68) (C13C1) Rabbit mAb2-环戊基-2-羟基

(Standard for GC)RPA70/RPA1 (4D9) Rat mAb4,6-二-1H-吡唑并[3,C]嘧啶

甲酸丁酯(Standard for GC, ≥99.5% (GC))MRPL11 Antibody溴-甲酸

二二丁(standard for GC,≥99.5%(GC))Etoposide2-(甲酰基基)-

甲基酸丁酯(Standard for GC,>99.5%(GC))Naked1 (C30F10) Rabbit mAb2-溴-4甲基苄

酸叔丁酯(standard for GC,≥99.5%(GC)Naked1 (C30F10) Rabbit mAb溴-甲

己酸丁酯(standard for GC,≥99.5%(GC))Caspase-12 Antibody2-溴-5-

2-丁酮(Standard for GC, ≥99.9% (GC))Caspase-12 Antibody2-氨基-甲氧基甲酸

戊酸丁酯(Standard for GC, ≥99.5% (GC))TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb-6-甲氧基喹啉

(standard for GC,≥99.9%(GC))TCF1/TCF7 (C63D9) Rabbit mAb溴-1,1,1-三氟酮

酸丁酯(standard for GC,≥99.7%(GC))Borzomib4,6-二-5-甲基嘧啶

1,2,丁三（BT）(standard for GC,≥99.5%(GC))Jagged2 (C83A8) Rabbit mAb对二三氟甲

间(standard for GC,>99.5%(GC))TCF1/TCF7 (C46C7) Rabbit mAb氟-5-溴酚

环己烷(Standard for GC,≥99.9%(GC))Shh (C9C5) Rabbit mAb1,2-双(三氟甲基)

αL艾杜糖苷酸酶(IDUA)ELISA试剂盒LIFR/CD118  白血病抑制因子受体100 ul

α2抗纤溶酶(α2-AP)ELISA试剂盒Lingo-1  Nogo受体反应蛋白1 Kit

α2巨球蛋白(α2-MG)ELISA试剂盒LIMK1  单丝氨酸蛋白激酶1100 ul

α2-HS糖蛋白(AHSG)ELISA试剂盒Phospho-LIMK1 (Thr508)/LIMK2 (Thr505)  酸化单丝氨酸蛋白激酶1/2100 ul

α1微球蛋白/bikunin前体(AMBP)ELISA试剂盒LIR-6  白细胞免疫球蛋白样受体6100µl

α1酸性糖蛋白(α1-AGP)ELISA试剂盒LIR-8/CD85c/LILRB5  白细胞免疫球蛋白样受体8500 ul

α1抗胰糜蛋白酶(AACT)ELISA试剂盒LIS1  无脑回的致病基因LIS1100 ul

α1抗胰蛋白酶(α1-AT)ELISA试剂盒LILRB3/CD85a/PirB  白细胞免疫球蛋白样受体-B20 ul

α1防御素(DEFA1)ELISA试剂盒LIX1  LIX15 mg
嗜肺军团菌PCR检测试剂盒厂家衔接因子蛋白含pH域蛋白1抗体Afzelechin-(4α→8)-epiafzelechin中文名：别名：分子式：C30H26O10

AIMP2抗体5-O-Methylgenistein中文名：异樱黄素别名：Isoprunetin分子式：C16H12O5

乙酰胆碱酶抗体Cinchonain IIa中文名：金鸡纳素IIa别名：分子式：C39H32O15

通道蛋白-7抗体Calycosin 7-O-β-D-glucopyraside中文名：毛蕊异黄酮苷别名：Calycosin 7-glucoside; Calycosin 7-O-glucoside分子式：C22H22O10

谷丙氨酸氨基转移酶1抗体3'-Methoxydaidzin中文名：3'-甲氧基大豆苷别名：分子式：C22H22O10
检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。