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注意事项：1．基础程序；2．扩增温度和延伸温度；3．反应时间；4．循环次数；5．PCR 反应液的配制；6．PCR技术的基本原理；7．PCR的反应动力学；8．PCR扩增产物；9．PCR反应体系与反应条件。

实验过程：
一、试剂准备
1. DNA模板
2．对应目的基因的特异引物（在PCR反应中，新合成的DNA是要接在一小段序列上才能继续按照模板DNA复制，而不能从无到有，凭空合成。这一小段序列就是你所要有设计的引物。可以是DNA也可以是RNA，一般20多bp，需要根据你的模板链设计。因此，扩增不同的基因需要设计不同的引物）
3．10×PCR Buffer
4．2mM dNTPmix：含dATP、dCTP、dGTP、dTTP各2mM
5．Taq酶
二、操作步骤
1．在冰浴中，按以下次序将各成分加入一无菌0.5ml离心管中。
10×PCR buffer             5μl
dNTP mixl                 4μl
引物1（10pM）               2μl
引物2（10PM）              2μl
Taq酶（2U/μl）            1μl
DNA模板（50ng-1μg/μl）　　　 1 μl
加ddH2O至               50 μl
视PCR仪有无热盖，不加或添加石蜡油。
2．调整好反应程序。将上述混合液稍加离心，立即置PCR仪上，执行扩增。一般：在93℃预变性3-5min，进入循环扩增阶段：93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s，循环30-35次，zui后在72℃ 保温7min。
3．结束反应，PCR产物放置于4℃待电泳检测或-20℃长期保存。
4．PCR的电泳检测：如在反应管中加有石蜡油，需用100μlLuFang进行抽提反应混合液，以除去石蜡油；否则，直接取5-10μl电泳检测。
三、注意事项
１．PCR反应应该在一个没有DNA污染的干净环境中进行设立一个的PCR实验室。
２．纯化模板所选用的方法对污染的风险有极大影响。一般而言，只要能够得到可靠的结果，纯化的方法越简单越好。
３．所有试剂都应该没有核酸和核酸酶的污染。操作过程中均应戴手套。
４．PCR试剂配制应使用zui高质量的新鲜双蒸水，采用0.22μm滤膜过滤除菌或高压灭菌。
５．试剂都应该以大体积配制，试验一下是否满意，然后分装成仅够一次使用的量储存，从而确保实验与实验之间的连续性。
６．试剂或样品准备过程中都要使用一次性灭菌的塑料瓶和管子，玻璃器皿应洗涤干净并高压灭菌。
７．PCR的样品应在冰浴上化开，并且要充分混匀。检测步骤：
一、 试剂的准备
从试剂盒中取出荧光PCR反应液(BC-qPCR MIX)、酶混合物(Enzymes MIX)，冰上融化并振荡混匀后，10000rpm离心10s。
设所需要的PCR反应管管数为N(N=样本数+1管阴性对照+1管阳性对照)，每个测试反应体系配制如下表：
试剂 每个反应加入的量 N个反应加入的量
荧光PCR反应液 14µL N×14µL
酶混合物 1 µL N×1 µL
总量 15 µL N×15µL
（1） 计算好各试剂的使用量，加入一适当体积洁净离心管中，充分混匀，10000rpm离心10s，向设定的N个PCR反应管中分别加入15μL荧光PCR反应液，向每管中加入处理后样品或阴性对照(NTC)和阳性对照(BC-PTC)5μL，10000rpm瞬时离心10秒。
7.2 qPCR反应条件
将各反应管放入定量PCR仪器的反应槽内。
推荐循环条件:
1循环 50℃ for 2 min
预变性 1循环 95℃ for 10 min
PCR扩增 40循环 95℃ for 15 sec
60℃ for 60 sec
在60℃延伸时收集荧光信号。报告基团：设置为FAM。淬灭基团：NONE，请勿选择ROX参比荧光。
组成及试剂配制:
1、酶标板：一块（96孔）
2、 标准品（冻干品）： 2瓶，请临用前15分钟内配制。每瓶以样品稀释液稀释至0.5ml，盖好后室温静置大约10分钟，同时反复颠倒/搓动以助溶解，其浓度为200 U/L，然后做系列倍比稀释（注：不要直接在板中进行倍比稀释），分别配制成200 U/L，100 U/L，50 U/L，25 U/L，12.5 U/L，6.25 U/L，3.12 U/L，样品稀释液直接作为空白孔 0 U/L。如配制100 U/L标准品：取0.3ml （不要少于0.3ml ）200 U/L的上述标准品加入含有0.3ml样品稀释液的Eppendorf管中，混匀即可，其余浓度以此类推。
3、 样品稀释液：1×20ml。
4、 检测稀释液A：1×10ml。
5、 检测稀释液B：1×10ml。
(梯度色谱级, ≥99.9%)ENPP1 (L520) Antibody二二己基硅烷

无水(无水级, 99.9%,H2O≤10ppm)Histone Deacetylase 1 (HDAC1) AntibodyDL-氨酰甘氨酸

无水(H2O:20-30ppm)IQGAP1 (D8K4X) XP® Rabbit mAb吲哚-酸

无水(无水级, 99.8%,H2O：30-50ppm)IQGAP1 (D8K4X) XP® Rabbit mAb羟基-2-甲基喹啉

茴香(分析标准品，用于萜分析，≥99.5% (GC))WIF1 Antibody(R)-羟基-2-

氨基-(三氟甲基)甲(98%)Ribosomal Proin L26 Antibody反式-基环己烷甲酸

(LC-MS)MRPL11 (D68F2) XP® Rabbit mAb4,4'-双[N-(1-萘基)-N-氨基]-4''-基三

甲中标样(分析标准品 基体：甲)eIF4E (C46H6) Rabbit mAb1,二甲基-2-(2-噻吩基)咪唑烷

2-氨基-基吡啶(97%)eIF4E (C46H6) Rabbit mAb2,二甲基呋喃

N,O-双(*基硅烷基)三氟酰(96%)eIF3C Antibody-2-氟甲

山嵛酸(标准品)DLK1 Antibody2,3,6-三氟溴苄

对溴(标准品)ENPP1 Antibody (Human Specific)三五氟酯

溴酚(标准品)Met (D1C2) XP® Rabbit mAb (PE Conjuga)1,二异基

对醌（用于光谱测定,≥99.5%(HPLC)）Mili Antibody吡啶-磺酸钠

基叔丁基(标准品)MATK/CHK (D2I6U) Rabbit mAb8-甲氧基-并[g]

对羟基甲酸正丁酯(标准品)Histone Deacetylase 4 (HDAC4) Antibody2-羟基-3,5,5-*基-2-环己-1-酮

溴代异烷(标准品)Naked2 (C67C4) Rabbit mAbN-(METHOXYBENZYL) BORONOBENZAMIDE

酸苄酯(标准品)Naked2 (C67C4) Rabbit mAb-2-甲硫基嘧啶-5-羧酸酯

阿立新A(Orexin A)ELISA试剂盒KLF8  KLF样转录因子8100 ul

κB抑制蛋白激酶(IKK)ELISA试剂盒KLF9  转录因子KLF9100 ul

γ谷氨酰转移酶(GGT)ELISA试剂盒KLF13/RFLAT-1  肠道内富含的Kruppel样因子13100 ul

γ-谷氨酰环化转移酶(GGCT)ELISA试剂盒KLH  血蓝蛋白100 ul

γ谷氨酸-半胱氨酸合成酶(γ-GCS)ELISA试剂盒KLH  血蓝蛋白100 ul

γ干扰素诱导蛋白16/p16(IFI16/p16)ELISA试剂盒KLK1  激肽释放酶1100 ul

γ干扰素诱导单核细胞因子(MIG/CXCL9)ELISA试剂盒kappa Opioid receptor  kappa型阿片受体100 ul

γ干扰素受体(IFN-γR)ELISA试剂盒mu Opioid receptor  µ-型阿片受体100 ul

γ干扰素(IFN-γ)ELISA试剂盒Phospho-mu Opioid Receptor (Ser375)  酸化µ-型阿片受体100 ul
腮腺炎病毒PCR检测试剂盒规格肾上腺髓质素抗体Luteolin 5-methyl ether中文名：木犀草素-5-甲醚别名：分子式：C16H12O6

腺苷受体A3抗体Kaempferol 3-O-sophoroside中文名：酚-3-O-槐糖苷别名：Kaempferol 3-O-β-sophoroside分子式：C27H30O16

ADRA2肾上腺素能受体2抗体Violane中文名：别名：分子式：C17H16O6

肾上腺素能受体β1抗体Luteolin 5,3'-dimethyl ether中文名：木犀草素-5,3'-二甲醚别名：7,4'-Dihydroxy-5,3'-dimethoxyflavone分子式：C17H14O6

肾上腺素能受体β2抗体（β2-AR ）Kaempferol 3-O-sophoroside-7-O-glucoside中文名：别名：分子式：C33H40O21乳腺癌耐药基因PCR检测试剂盒说明书